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多头带绦虫TPx基因片段的克隆及原核表达

文献类型： 中文期刊

作者： 李永光;李文卉;李航;盖文燕;王鸿盛;姚菊霞;王艳华;张德林;贾万忠;Radu Biaga;付宝权

作者机构：

关键词： 多头带绦虫;多头蚴;硫氧还蛋白过氧化物酶;重组蛋白;免疫原性

期刊名称：中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2009 年 39 卷 03 期

页码： 251-256

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 从自然感染的病羊脑内采集多头蚴原头节,提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增多头带绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(TmTPx)基因片段,PCR产物连接到pMD18-T载体,转化至大肠杆菌DH5α后测序,发现克隆到的TmTPx基因片段开放阅读框为453 bp,编码150个氨基酸。对TmTPx基因片段进行限制性酶切后连接到表达载体pGEX-4T-1,构建重组表达质粒pGEX-4T-TmTPx,转化大肠杆菌DH5α后筛选阳性克隆,经限制性酶切分析、PCR及测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21,以IPTG进行诱导表达,用SDS-PAGE分析表达产物。结果显示,成功表达了大小约为43 ku的融合蛋白。对表达产物纯化后免疫家兔,采集血清用ELISA测定抗体效价,发现兔抗TmTPx重组蛋白的抗体能够与多头蚴原头节抗原发生特异性反应,说明该重组蛋白具有较好的免疫原性。

分类号： S852.734

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