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旋毛虫乳酸脱氢酶基因的克隆表达及组织定位

文献类型： 中文期刊

作者： 牛栋玉;张念章;李文卉;刘垠鞠;秦洪涛;张永芝;殷宏;付宝权

作者机构：

关键词： 旋毛虫;乳酸脱氢酶;反应原性;免疫组化定位

期刊名称：中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2025 年 4 期

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 为了研究旋毛虫乳酸脱氢酶(TsLDH)的反应原性及组织分布特点,从GenBank中获取TsLDH基因序列进行生物信息学分析,设计引物对其进行RT-PCR扩增,将PCR产物连接到pET-30a质粒构建重组表达质粒pET30a-TsLDH,转化大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达.将重组蛋白rTsLDH纯化后,通过Western-blot进行反应原性分析,与弗氏佐剂混合免疫家兔,采血分离血清,用间接ELISA方法检测家兔抗rTsLDH多克隆抗体效价.并利用纯化后的家兔抗rTsLDH抗体对TsLDH进行组织定位.经优化后在37 ℃,200 r/min,1 mmol/L IPTG诱导条件下成功表达重组蛋白rTsLDH,其分子质量约为39.4 kDa,且主要以包涵体形式存在.Western-blot分析表明重组蛋白rTsLDH可以被旋毛虫感染猪血清识别,具有反应原性.多克隆抗体效价为1∶5.12×105.组织定位结果显示,TsLDH存在于旋毛虫3个发育时期的体表及杆状体中,且在成虫时期可分泌到宿主肠组织周围,但不能分泌到感染的肌肉组织中.结果表明rTsLDH具有良好的反应原性,且TsLDH存在于虫体的各个时期,为旋毛虫病诊断候选抗原及药物靶标筛选提供了依据.

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