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非洲猪瘟病毒pE199L蛋白在大肠杆菌中的表达及免疫原性分析

文献类型： 中文期刊

作者： 张亮;张越;安芳兰;杨进才

作者机构：

关键词： 非洲猪瘟;pE199L蛋白;原核表达;免疫原性

期刊名称：中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2025 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 本研究旨在利用大肠杆菌表达系统制备非洲猪瘟病毒（ASFV）囊膜蛋白pE199L，并评估其免疫原性。将优化后的pE199L蛋白的基因克隆至pET-32a载体，重组质粒经大肠杆菌诱导表达后通过亲和层析纯化，并进行Western-blot鉴定其特异性。纯化的蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体，通过间接ELISA和细胞间接免疫荧光（IFA）检测血清抗体效价及特异性，最后通过ASFV复制抑制试验测定免疫血清的抗病毒活性。结果显示，成功制备了ASFV pE199L蛋白，免疫小鼠的第28天血清抗体效价达1∶128 000，该血清可与感染ASFV的猪骨髓巨噬细胞（BMDM）发生特异性免疫结合。流式细胞术检测表明，免疫后小鼠脾CD4+和CD8+ T淋巴细胞显著活化，血清中IFN-γ和IL-4细胞因子的含量均显著上升。病毒复制抑制试验显示，pE199L蛋白诱导的抗体可有效抑制ASFV复制。综上，pE199L蛋白具有良好免疫原性，为ASFV亚单位疫苗研发提供了重要候选抗原和实验基础。

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