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宿主因子转氨醛糖酶1对A型流感病毒复制的影响及其机制的初步探究

文献类型： 中文期刊

作者： 李梦雅;王一涵;李奇兵;王波;王一晗;赵普;刘旭伟;单智博;姜丽;陈化兰;李呈军

作者机构：

关键词： 转氨醛糖酶1;A型流感病毒;病毒复制;宿主因子

期刊名称：中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2025 年 9 期

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 为了研究宿主因子转氨醛糖酶1(TALDO1)对流感病毒复制的影响及其作用机制,本研究构建重组质粒pCAGGS-TALDO1-Flag并经PCR和测序鉴定正确后转染HEK293T细胞,24 h后采用western blot检测TALDO1蛋白的表达及反应原性.结果显示在38 ku处出现特异性条带.将TALDO1 siRNA(si_TALDO1)转染A549细胞(干扰组),48 h后采用荧光定量PCR(qPCR)检测TALDO1 mRNA的相对转录水平,分析si_TALDO1的干扰效果,利用细胞活力检测试剂盒检测干扰TALDO1后对细胞活力的影响.结果显示,与转染si_NC组(NC组)相比,干扰组细胞中TALDO1基因的相对转录水平极显著降低(P＜0.0001),且与NC组的细胞相比活力无显著差异.将si_TALDO1转染A549细胞,36h后将A型流感病毒(IAV)WSN株感染上述细胞,分别培养24 h和48 h,收获上清液经噬斑滴定试验测定病毒滴度;将上清液10倍倍比稀释后感染MDBK细胞,通过噬斑计数,检测干扰TALDO1后对流感病毒复制的影响.将si_TALDO1转染A549细胞,48h后将WSN株感染细胞,分别在感染后0、3 h、6h和9h收获细胞后采用western blot检测细胞中流感病毒部分蛋白的表达水平.将pCAGGS-TALDO1-Flag转染HEK293T细胞,36 h后以WSN株感染细胞,采用Co-IP试验检测TALDO1与病毒PB2、PB1、PA和NP蛋白的相互作用.将si_TALDO1转染A549细胞,36 h后将WSN株感染细胞.在感染后早期(3 h～5 h)收获细胞,经qPCR检测细胞中流感病毒NP基因的转录水平;在感染后2h、3h、4h和5h收获细胞经激光共聚焦试验检测NP蛋白的定位,采用ZEN软件统计WSN株NP蛋白出入核的比例.分析干扰TALDO1后对流感病毒复制早期阶段的影响.结果显示,与NC组相比,流感病毒感染后24 h和48 h,干扰组细胞中的病毒滴度均极显著升高(P＜0.01).流感病毒PB2、PB1、PA和HA蛋白的表达水平均随感染时间的延长呈上升趋势,与NC组相比,病毒感染后6h干扰组细胞中PB1和PA蛋白的表达量均极显著升高(P＜0.0001);病毒感染后9hPB2、PB1、PA和HA蛋白的表达量均极显著升高(P＜0.01、P＜0.001、P＜0.0001).未检测到PB2、PB1、PA、NP蛋白与TALDO1蛋白存在相互作用.与NC组相比,各时间点干扰组细胞中NP基因的转录水平均极显著升高(P＜0.001、P＜0.0001);激光共聚焦试验结果显示,病毒感染后2 h和3 h,干扰组细胞中NP蛋白的入核比例呈上升趋势,且明显高于NC组,感染后4h与5 h干扰组细胞中的NP蛋白开始出核,且出核的NP蛋白逐渐增多达65％,明显多于NC组细胞.上述结果表明,TALDO1通过影响IAV复制的早期阶段抑制流感病毒的复制,本研究揭示了宿主因子TALDO1对IAV复制的影响及其作用机制,为抗流感病毒提供了潜在作用靶点及有效防控流感奠定了基础.

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