文献类型： 中文期刊
作者： 杨蕊;靳家鑫;张泽;时文健;张广智;丁家波;鑫婷
作者机构：
关键词： 牛;白细胞介素-8;单克隆抗体;ELISA;牛结核病
期刊名称：中国畜牧兽医
ISSN： 1671-7236
年卷期： 2025 年 08 期
页码：
收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）
摘要： 【目的】白细胞介素-8(IL-8)是重要的趋化因子,参与机体免疫反应,其水平升高与多种感染性疾病、自身免疫疾病等密切相关,也被鉴定为活动性肺结核病、结核性脑膜炎、牛结核病的检测靶标。本研究旨在制备针对牛IL-8的单克隆抗体,开发牛IL-8夹心ELISA检测试剂盒,用于牛血清或血浆中IL-8的定量检测,为牛结核(bovine tuberculosis,bTB)及其他炎症相关疾病的诊断及免疫学指标检测提供工具。【方法】将牛IL-8基因分别连接至pGEX-6P-1和pcDNA3.1载体,并利用大肠杆菌与293F细胞进行表达,以GST亲和柱和镍柱纯化重组蛋白;采用真核表达的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术制备并筛选针对牛IL-8的单克隆抗体;通过棋盘法筛选最佳抗体对并建立夹心ELISA检测方法;定量检测排菌期结核病牛、非排菌期结核病牛和健康牛血浆中IL-8水平,评价单克隆抗体对天然牛IL-8的识别能力及其对结核病牛的检测效果。【结果】SDS-PAGE结果显示,原核和真核表达系统制备的IL-8均以可溶形式表达,且纯化的蛋白纯度高于90%;经3轮亚克隆筛选共获得2B8、2F5等5株稳定分泌牛IL-8抗体的单克隆细胞株,亚型鉴定均为IgG1型;棋盘法筛选结果显示,4G10和3D5-HRP为最佳配对抗体;以4G10和3D5-HRP建立的ELISA方法对不同感染状态的结核病牛血浆进行定量检测,结果显示,结核病牛血浆中IL-8含量极显著高于健康牛(P<0.01)。【结论】成功制备抗牛IL-8的单克隆抗体并建立牛IL-8夹心ELISA检测方法,可实现对天然牛IL-8的定量检测,有潜力用于结核病牛的筛查和牛免疫学指标检测。
分类号：
- 相关文献
[1]牛C-反应蛋白夹心ELISA定量检测方法的建立与应用. 靳家鑫,杨蕊,张泽,时文健,张广智,丁家波,鑫婷. 2025
[2]应用重组抗原建立检测牛传染性胸膜肺炎的间接ELISA方法. 辛九庆,高玉龙,李媛,王砚范,钱爱东. 2006
[3]牛γ干扰素单克隆抗体的制备与抗原捕获ELISA检测方法的建立. 张月美,陈伟业,葛金英,杨帆,步志高. 2009
[4]羊口疮病毒B2L蛋白单克隆抗体的制备及鉴定. 孔汉金,张克山,刘永杰,尚佑军,刘湘涛. 2014
[5]抗H3N2亚型猪流感病毒单克隆抗体的制备与鉴定. 孔维,乔传玲,陈艳,杨焕良,展小过,辛晓光,陈化兰. 2010
[6]SAMHD1蛋白单克隆抗体的制备及SAMHD1在不同细胞中的表达鉴定. 戈曼,吴星亮,尹鑫,魏萍,王晓钧. 2013
[7]C型口蹄疫病毒单克隆抗体的制备与鉴定. 杨沁,林彤,常惠芸,薛慧文. 2013
[8]SAMHD1蛋白单克隆抗体的制备及SAMHD1不同细胞中的表达鉴定. 戈曼,吴星亮,尹鑫,魏萍,王晓钧. 2013
[9]兔出血症病毒抗原捕获ELISA检测方法的建立. 秦海斌,刘怀然,曲连东,刘家森,韩凌霞,姜骞,李亚明,杨增岐. 2008
[10]兔出血症病毒抗原捕获ELISA检测方法. 秦海斌,刘怀然,刘家森,姜骞,韩凌霞,司昌德,曲连东. 2007
[11]检测猪鼻支原体抗原的ELISA方法的建立及其应用. 朱红振,危艳武,黄立平,刘丹,夏德利,吴洪丽,边海桥,冯力,刘长明. 2019
[12]单增李斯特菌P60单克隆抗体的制备及初步应用. 殷茵,刘溯,王芳,朱学亮,周邦信,骆学农. 2015
[13]毒死蜱单克隆抗体的制备及鉴定. 吴雅欣,许园园,潘家荣. 2009
[14]对硫磷单克隆抗体的制备及鉴定. 许园园,吴雅欣,潘家荣. 2009
[15]H5亚型禽流感病毒单克隆抗体的制备和鉴定. 黎玉梅,邓国华,冉多良,熊蕊,陈化兰. 2007
[16]鸡SIgA重链单克隆抗体的制备及新城疫病毒和禽流感病毒特异黏膜SIgA检测方法的建立. 肇慧君,陈伟业,葛金英,王喜军,步志高. 2012
[17]O型口蹄疫Cathay拓扑型病毒单抗制备及双抗体夹心ELISA方法的初步建立. 廖焕程,石正旺,罗俊聪,王婉莹,冯露,周静,张帆,石鑫泰,田宏. 2024
[18]洋葱黄矮病毒同种单抗夹心ELISA检测方法的建立. 王斌,刘建青,战笑蕾,李方方,李小宇,梁雨欣,王晨,张金花,张春雨,王永志. 2024
[19]检测牛IFN-γ 双抗体夹心 ELISA 的建立及在牛结核病诊断上的初步应用. 张改梅,贾红,侯绍华,鑫婷,郭晓宇,袁维峰,刘淑清,吴竞,高新桃,李明,董瑞凯,朱鸿飞. 2014
[20]检测牛结核抗体新型ELISA方法的建立及应用. 郭设平,刘思国,王春来,宫强,邵美丽,张秀华,郭洋. 2007
作者其他论文 更多>>
-
布鲁氏菌IF-3蛋白生物信息学分析及其多克隆抗体制备
作者：赵彦骁;吴逸凡;张孟涛;戴恩慧;丁家波;孙东杰
关键词：布鲁氏菌;IF-3蛋白;生物信息学分析;多克隆抗体
-
基于MS2噬菌体的西尼罗病毒装甲RNA质控品的制备
作者：刘丹;高建帅;张博源;李慧彤;蒋卉;范学政;张广智;丁家波;熊涛;沈青春
关键词：西尼罗病毒(WNV);MS2噬菌体;装甲RNA
-
非洲马瘟病毒和西尼罗病毒多酶恒温核酸快速扩增检测方法的建立
作者：钱佳豪;刘丹;周师众;张博源;高建帅;许霄峰;李慧彤;丁家波;王春凤;沈青春
关键词：非洲马瘟病毒;西尼罗热病毒;多酶恒温快速扩增技术
-
鸡传染性贫血病疫苗研究进展
作者：汪磊;梁琳;罗润琪;梁瑞英;胡丹丹;司红彬;丁家波;邸文达;汤新明
关键词：鸡传染性贫血病;鸡传染性贫血病毒(CIAV);感染与免疫;疫苗研发
-
布鲁氏菌脂多糖的生物合成及其在免疫逃逸中的生物学功能
作者：王恒泰;蒋卉;李朋;丁家波
关键词：布鲁氏菌;脂多糖;胞内寄生;免疫逃逸
-
结核分枝杆菌牛变种C68001转座子突变体库的构建
作者：时文健;徐磊;张泽;杨蕊;张广智;许霄峰;辛凌翔;王楠;鑫婷
关键词：结核分枝杆菌牛变种;MycoMar T7;突变体库;噬菌体
-
牛C-反应蛋白夹心ELISA定量检测方法的建立与应用
作者：靳家鑫;杨蕊;张泽;时文健;张广智;丁家波;鑫婷
关键词：C-反应蛋白;单克隆抗体;ELISA;牛结核病