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牛C-反应蛋白夹心ELISA定量检测方法的建立与应用

文献类型： 中文期刊

作者： 靳家鑫;杨蕊;张泽;时文健;张广智;丁家波;鑫婷

作者机构：

关键词： C-反应蛋白;单克隆抗体;ELISA;牛结核病

期刊名称：中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2025 年 6 期

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 制备针对牛C-反应蛋白(CRP)的单克隆抗体,建立牛CRP双抗体夹心ELISA定量检测方法,为牛细胞因子检测以及感染的快速诊断提供有力工具.利用原核表达系统和293F真核表达系统表达牛CRP,采用亲和层析纯化重组蛋白,免疫小鼠后利用淋巴细胞杂交瘤技术制备并筛选针对牛CRP的单抗,以棋盘法筛选抗体对并建立夹心ELISA方法,以临床样品验证该方法的可行性.SDS-PAGE结果显示成功纯化到CRP,经3轮亚克隆成功获得5株针对牛CRP的单抗细胞株,其中3H4和2G4-HRP抗体对的检测效果最佳.临床样品检测显示结核菌感染早期的牛血清中CRP质量浓度显著高于健康牛,结果说明制备的牛CRP单抗对可以识别天然牛CRP.检测结核排菌期和非排菌期的牛血浆样品,发现排菌期的结核病牛CRP质量浓度显著高于非排菌期的结核病牛.结果表明,建立的牛CRP夹心ELISA检测方法可用于牛结核病的诊断,为分析牛免疫感染状态及诊断牛感染性疾病奠定了基础.

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