文献类型： 中文期刊
作者： 童武;陈焕春;童光志;徐彦召;周艳君;姜一峰;张善瑞;王亚欣;朱建平;虞凌雪;孙晶
作者机构：
关键词： 猪繁殖与呼吸综合症病毒;O型口蹄疫病毒;感染性分子克隆;重组病毒
期刊名称：生物工程学报
ISSN： 1000-3061
年卷期： 2012 年 28 卷 12 期
页码： 1431-1440
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 以高致病性猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗的感染性分子克隆(rHuN4-F112)作为载体,将O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1基因的421~480nt(141~160aa)和598~639nt(200~213aa)两优势保护性抗原表位串联成的目的基因,通过突变PCR的方法插入Nsp2中的508~532位缺失区域,经体外转录后转染至BHK-21细胞中培养36 h,将上清接种至MARC-145细胞中培养,并在MARC-145细胞中连续传代,拯救重组病毒。经RT-PCR扩增,MluⅠ酶切及测序验证,结果表明插入的外源基因及人为突变的MluⅠ分子标记都正确,说明重组病毒拯救成功,且该重组病毒能够在MARC-145细胞中稳定传代,将此重组病毒命名为rPRRSV-F112-O/VP1ep。rPRRSV-F112-O/VP1ep能够在MARC-145细胞上引起明显的细胞病变,间接免疫荧光检测表明外源基因在该病毒中成功获得了表达。经过生物学特性分析,该病毒的TCID50=-log10-6.75/0.1 mL,且在MARC-145细胞中整体生长速度与其亲本病毒rHuN4-F112(△508-532)相似,但明显高于rHuN4-F112病毒。
分类号： S852.65
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