文献类型： 中文期刊
作者： 文玉涵;于瑞明;张莉萍;杜晓华;潘丽;王永录;郭慧琛;刘霞;刘新生
作者机构：
关键词： PDCoV;S蛋白;双脯氨酸突变;免疫原性
期刊名称：微生物学报
ISSN： 0001-6209
年卷期： 2024 年
页码：
收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2024版）
摘要： 【目的】猪德尔塔冠状病毒(porcine deltacoronavirus， PDCoV)是一种重要的猪肠道冠状病毒，在世界范围内给生猪养殖业带来了巨大的经济损失，截至目前，尚无商品化疫苗可用。本研究选择宿主免疫反应主要诱因因子S蛋白，并将PDCoV S蛋白七肽重复序列(HR1)与中心螺旋之间的环中855和856两个位点突变为双脯氨酸(E855P和V856P)，然后利用ExpiCHO-S真核表达系统表达、纯化了重组S蛋白和双脯氨酸突变S蛋白(S2P)并评价其免疫原性及免疫保护性，以初步研制一种免疫效果较好的PDCoV亚单位疫苗。【方法】利用间接酶联免疫吸附法检测免疫小鼠血清特异性抗体IgG水平；利用血清中和试验检测免疫小鼠血清中和抗体滴定；通过流式细胞术检测免疫小鼠T淋巴细胞增殖情况；通过细胞因子检测免疫小鼠IFN-γ、IFN-α、IL-2和IL-4等细胞因子分泌情况；采用RT-qPCR检测攻毒后小鼠肠道组织PDCoV病毒载量；采用病理组织切片检测小鼠肠道有无病理损伤；利用免疫组织化学检测小鼠肠道组织PDCoV抗原分布情况。【结果】免疫原性结果显示：小鼠在肌肉注射S组和S2P组亚单位疫苗后能够产生较高水平的抗PDCoV特异性IgG抗体，且免疫后42 d的小鼠血清均对PDCoV具有中和作用，其中，S2P组对PK细胞50%中和保护效价显著高于S组。此外，S和S2P组显著地诱导小鼠CD4+T淋巴细胞增殖，且S2P组高于S组，而S2P组能够诱导小鼠CD8+T淋巴细胞增殖，但S组与PBS组并无差异。同时，S组和S2P组诱导的IFN-γ、IFN-α、IL-2和IL-4等细胞因子水平均显著高于PBS组，但S组和S2P组并无差异。免疫保护性结果显示：PBS组肠组织中可检测到PDCoV病毒，肠组织出现病理损伤且可见大量PDCoV抗原，而S组和S2P组未检测到PDCoV病毒且未观察到肠组织损伤，二者之间无明显差异。【结论】S2P组较之S组能够诱导小鼠产生更高水平的抗PDCoV体液免疫应答，且两组疫苗对小鼠均有一定的保护效果，为后续研究PDCoV亚单位疫苗奠定一定的基础。
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