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猪圆环病毒2型LAMP-CRISPR/Cas12a检测方法的建立与应用

文献类型： 中文期刊

作者： 毛首会;杜国玉;刘晓波;吴锦艳;兰喜;何继军;尚佑军;王桂琴;刘永杰

作者机构：

关键词： 猪圆环病毒2型;CRISPR/Cas12a检测;环介导等温扩增

期刊名称：中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2024 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 本研究旨在建立一种快速、准确且易于操作的猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2，PCV2)检测方法。首先以PCV2的ORF2基因作为靶基因，设计4条LAMP与5条CRISPR特异性引物，再分别优化获得LAMP反应体系和CRISPR检测体系中各成分最佳配比浓度，经过特异性、灵敏度、重复性以及符合性验证，最终建立了快速检测PCV2的LAMP-CRISPR/Cas12a方法。结果显示，该方法最小检测量接近1 copy质粒DNA，灵敏度远高于本实验室常用的PCR方法，且在相同条件下只有PCV2呈阳性结果，其他均呈现阴性，表明特异性良好。同时该方法具有良好的重复性，批内变异系数小于5%，批间变异系数小于10%，该方法与qPCR之间的符合率较高，可通过肉眼观察在蓝光下的反应产物判断结果。结果表明，建立的LAMP-CRISPR/Cas12a体系适用于PCV2的快速检测。

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