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猪瘟病毒双抗原夹心ELISA抗体检测方法的建立与应用

文献类型： 中文期刊

作者： 谢亚格;罗俊聪;石正旺;廖焕程;陈婕;朱昱茜;王琳;杨倩倩;武嘉惠;茹毅;田宏;何继军

作者机构：

关键词： 猪瘟病毒;E2蛋白;ELISA

期刊名称：畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2026 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 旨在建立检测猪瘟病毒E2蛋白抗体的双抗原夹心ELISA方法。利用BioEdit软件对比猪瘟病毒与牛病毒性腹泻病毒E2蛋白完整序列，筛选猪瘟病毒E2蛋白特异性序列，构建pCDNA3.1-2×rE2-His重组表达载体，通过CHO细胞表达2×rE2-His蛋白，采用凝血酶切除蛋白His标签，将切除His标签的2×rE2蛋白作为包被抗原，辣根过氧化物酶标记的2×rE2-His蛋白作为检测抗原，经过一系列的反应条件优化，建立了双抗原夹心ELISA方法，对其特异性、敏感性、重复性进行评估，并比较与商品化试剂盒的符合率。结果表明，该方法的抗原包被浓度为0.5 μg·mL-1，血清稀释度为1: 4，酶标抗原稀释度为1: 40 000；该方法与其他常见猪病（塞内卡病毒、猪伪狂犬病病毒、猪流行性腹泻病毒、口蹄疫病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒）阳性血清无交叉反应、与血清学检测中易发生交叉反应的牛病毒性腹泻病毒阳性血清不反应，具有良好的特异性；可检测抗体阳性血清的最大稀释比例达1: 2 048；批内、批间变异系数均小于10％，具有良好的重复性；与IDEXX猪瘟抗体检测试剂盒的检测结果符合率为97.1%。本研究建立的双抗原夹心ELISA检测方法和IDEXX猪瘟抗体检测试剂盒同时评价猪瘟活疫苗（C株）联合E2亚单位疫苗免疫的2只健康猪抗体消长规律，本方法可提前6 d检出抗体应答，两种方法均显示抗体水平在免疫后37 d达到高峰，随后趋于稳定。本研究建立的猪瘟病毒双抗原夹心ELISA抗体检测方法特异性强、敏感性高、重复性好，适用于猪瘟的临床诊断与免疫效果评估。

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