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基于非洲猪瘟病毒MGF100-1L基因的荧光定量PCR方法的建立与评价

文献类型： 中文期刊

作者： 董睿;芮弦;石正旺;潘阳阳;包世俊;曾巧英;朱紫祥

作者机构：

关键词： 非洲猪瘟病毒;MGF100-1L基因;荧光定量PCR

期刊名称：农业生物技术学报

ISSN： 1674-7968

年卷期： 2026 年 34 卷 02 期

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)引发的一种高度传染性疾病，其致死率极高。本研究旨在开发一种特异、灵敏的ASFV TaqMan荧光定量PCR(real-time PCR, qPCR)检测方法。对ASFV多基因家族(multigene families, MGFs)中的MGF100-1L基因(GenBank No. MK333180.1)序列进行分析，针对该基因保守区设计并筛选出特异性引物和探针组合。通过构建包含该基因片段的重组质粒，作为标准品用于优化qPCR反应体系，建立ASFV qPCR检测方法，并对方法的特异性、灵敏性、重复性、符合率进行评价。用该检测方法对90份临床样品进行检测，并与世界动物卫生组织(World Organisation for Animal Health, WOAH)推荐的检测方法进行比对。结果表明，标准曲线线性方程为Y=-3.304X+38.793，相关系数为0.99，表明线性良好。灵敏性分析发现，所建立的qPCR方法最低检出限(limit of detection, LOD)为0.87拷贝/µL，灵敏性与WOAH方法(0.94拷贝/μL)基本一致。特异性分析验证了该方法与猪瘟病毒(Classical swine fever virus, CSFV)、伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)、猪细小病毒(Porcine parvovirus, PPV)、猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2, PCV2)及口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus, FMDV)等均无交叉反应。临床样品检测中，该方法与WOAH推荐方法相比，一致性高(Kappa=0.903, P<0.01)，且对弱阳性样本的检出率显著提升(比WOAH方法多检出4个样本)。本研究成功构建了基于ASFV MGF100-1L基因的qPCR检测体系，该体系展现出优异的特异性、灵敏性，且与现有经典方法检测结果高度一致。该方法为临床ASFV检测，特别是早期诊断和防控提供了更灵敏可靠的技术手段。

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