文献类型： 中文期刊
作者： 孙树凯;席飞;郑海学;朱国梁;朱紫祥
作者机构：
关键词： 非洲猪瘟病毒;单克隆抗体;M1249L蛋白
期刊名称：中国兽医科学
ISSN： 1673-4696
年卷期： 2025 年
页码：
收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）
摘要： 本研究旨在制备非洲猪瘟病毒（ASFV）M1249L蛋白的单克隆抗体并分析其亚型、灵敏性及反应性。首先对M1249L（673 aa～1249 aa）序列进行密码子优化，并将该片段插入pET-28a载体中，构建原核表达质粒；经过转化、挑取单克隆、诱导表达及蛋白纯化，用纯化后的M1249L截短蛋白免疫小鼠；经细胞融合、有限稀释法筛选分泌抗体的杂交瘤细胞株，进行亚型鉴定和腹水制备。采用蛋白质免疫印迹（Western-blot）和间接免疫荧光试验（IFA）检测该单抗的反应性。结果显示，该单抗1D6重链属于IgG1型，轻链为Kappa型，腹水抗体效价可达1∶1 024 000。Western-blot结果显示，该单克隆抗体能够特异性识别ASFV感染后不同时间点猪肺泡巨噬细胞（PAMs）表达的M1249L蛋白以及HEK 293T细胞转染不同质粒量后表达的M1249L蛋白。IFA结果显示，在ASFV感染的PAMs细胞中出现绿色荧光，表明有良好的反应性。综上所述，本研究成功制备出M1249L单克隆抗体，为后续研究M1249L蛋白的生物学功能和ASFV诊断检测奠定了基础。
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