数字农科院2.0

敲除硒蛋白S基因BHK-21细胞可增强口蹄疫病毒复制

文献类型： 中文期刊

作者： 芮弦;董睿;石正旺;潘阳阳;包世俊;曾巧英;朱紫祥

作者机构：

关键词： CRISPR-Cas9;口蹄疫病毒;硒蛋白S;RNA测序;天然免疫;细胞系

期刊名称：畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2026 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 本研究旨在通过构建Selenos基因敲除的BHK-21细胞系，揭示SelS蛋白在宿主抗病毒防御中的功能及对FMDV复制的调控机制。采用CRISPR-Cas9系统构建Selenos基因敲除的BHK-21细胞系：设计针对叙利亚仓鼠（Mesocricetus auratus）Selenos基因外显子区域的sgRNA，通过慢病毒载体（lentiCRISPR v2）转染并经嘌呤霉素筛选获得单克隆细胞株，经测序及Western blotting验证敲除效率，同时利用CCK8试验评估细胞活性，并进行细胞形态学分析。将BHK21-SELENOS-KO与对照细胞（BHK21-Cas9-NC）同步感染FMDV，通过细胞病变效应（CPE）、间接免疫荧光、Western blotting、病毒滴度测定及RT-qPCR分析病毒复制动态，并结合转录组RNA测序与RT-qPCR验证筛选差异表达基因，进行信号通路富集分析。结果显示，成功构建SelS基因敲除的BHK-21细胞系（BHK21-SELENOS-KO），敲除导致SelS蛋白功能完全丧失，但细胞增殖与染色体稳定性无显著改变。病毒感染试验显示，敲除细胞中FMDV复制水平显著增强：病毒蛋白表达量及病毒产率升高，平均荧光强度为对照细胞的2.1倍（P<0.001），细胞病变效应（CPE）更明显。转录组分析发现，敲除导致226个基因上调、548个基因下调，差异基因显著富集于cGMP-PKG、钙信号及PI3K/Akt等免疫相关信号通路，RT-qPCR验证结果与测序一致。综上表明，SelS蛋白在宿主抗病毒免疫中发挥关键作用，通过限制FMDV复制参与防御过程。本研究建立的BHK21-SELENOS-KO细胞系为病毒-宿主互作研究提供新工具，并为口蹄疫疫苗工艺改进及抗病毒药物靶点开发提供科学依据。

分类号：

  • 相关文献

[1]牛Mx1抗口蹄疫病毒作用的研究. 王洪梅,辛婷婷,刘文浩,张亮,刘永生,宋玲玲,侯佩莉,何洪彬. 2013

[2]稳定表达KCTD1基因的PK15细胞系构建及其对FMDV和VSV复制影响的初步研究. 张艳,董苏洁,张志东,李彦敏. 2025

[3]Tollip敲除猪肾细胞系的构建. 王家丽,杨帆,邵文华,黄梦瑶,曹伟军,蒲秀瑛,张伟,郑海学. 2024

[4]CISD2敲除细胞系的构建及其对口蹄疫病毒复制的影响. 陈治彤,张伟,蔡建涛,吕岳芹,刘泓屹,曹伟军,顾有方,郑海学,杨帆. 2025

[5]RAB20基因敲除PK-15细胞系的构建及其对口蹄疫病毒复制的影响. 蔡建涛,张伟,陈治彤,刘泓屹,吕岳芹,曹伟军,冷非凡,杨帆,郑海学. 2025

[6]猪源TRAF3基因编辑细胞系的构建及缺失表型研究. 邵文华,杨帆,曹伟军,陈创伟,王伟,郑海学,张伟,朱紫祥,赵宗胜. 2025

[7]CRISPR-Cas9介导的TRIM3基因敲除细胞系的建立及其应用. 裴丹诗,范许许,朱兆宇,王一卓,何路,任青峰,李熙忠,郑海学,李伟伟,万博. 2025

[8]宿主蛋白TRIM7对口蹄疫病毒复制的影响. 刘泓屹,张伟,蔡建涛,古涛鸣,王良锋,陈治彤,曹伟军,郑海学,杨帆,张桂红. 2025

[9]敲除LTA4H基因的PK-15细胞系构建及其对口蹄疫病毒复制的影响. 王家丽,蒲秀瑛,杨帆,邵文华,黄梦瑶,曹伟军,郑海学,张伟. 2024

[10]LULL1基因敲除或过表达PK-15细胞系的构建及其对口蹄疫病毒复制的影响. 王一卓,范许许,朱兆宇,裴丹诗,何路,李熙忠,任青峰,郑海学,朱紫祥,李伟伟,蒋大伟. 2025

[11]CRISPR/Cas9介导的ALKBH5基因敲除细胞系的建立及其应用. 任青峰,李伟伟,裴丹诗,王一卓,何路,朱兆宇,李熙忠,郑海学,范许许,万博. 2026

[12]稳定表达抗口蹄疫病毒IgA抗体细胞系的建立与应用. 欧阳一凡,刘锋,李坤,孙普,曹轶梅,马雪青,李凤娟,白兴文,袁红,卢曾军,李平花. 2025

[13]猪源DDX56对口蹄疫病毒的复制及其对病毒诱导的RLR通路调节的研究. 付绍祖,李露露,张敬,李丹,郑海学. 2019

[14]猪RIG-I真核表达载体的构建及其抗口蹄疫病毒作用研究. 王国庆,朱紫祥,曹伟军,杨帆,毛箬青,李丹,刘磊,郑海学. 2015

[15]口蹄疫病毒抑制宿主天然免疫应答研究进展. 张向乐,朱紫祥,郑海学. 2018

[16]TPL2促进口蹄疫病毒在BHK-21细胞复制. 魏南南,徐守兴,史喜娟,卢炳州,张克山,郑海学,刘湘涛. 2018

[17]口蹄疫病毒3D蛋白促进TLR3介导的Ⅰ 型干扰素产生. 李露露,张敬,李丹,郑海学. 2020

[18]口蹄疫病毒2B蛋白通过转录水平抑制宿主天然免疫的新机制. Qiao Xue,Ke Ma,Fan Yang,Huisheng Liu,Weijun Cao,Pengfei Liu,Zixiang Zhu,郑海学,《中国兽医科学》编辑部. 2025

[19]环状RNA的研究进展. 张潆月,马月辉,赵倩君. 2017

[20]利用CRISPR-Cas9系统定向诱变棉花精氨酸酶基因. 孟志刚,王艳玲,孟钊红,熊兰兰,张锐,郭三堆. 2015

作者其他论文 更多>>