CRISPR/Cas9介导的ALKBH5基因敲除细胞系的建立及其应用
文献类型: 中文期刊
作者: 任青峰;李伟伟;裴丹诗;王一卓;何路;朱兆宇;李熙忠;郑海学;范许许;万博
作者机构:
关键词: ALKBH5;口蹄疫病毒;细胞系
期刊名称:中国兽医科学
ISSN: 1673-4696
年卷期: 2026 年
页码:
收录情况: 北大核心(2023版) ; ; CSCD(2025-2026年度) ; ; 科技核心(2024版) ; ; 农林核心(2024版)
摘要: 旨在阐明ALKBH5基因通过m6A去甲基化酶功能在口蹄疫病毒(FMDV)复制中的作用与机制。通过CRISPR/Cas9技术成功构建了ALKBH5基因敲除的BHK-21细胞系,并经Western-blot验证敲除效率。CCK-8试验证实敲除后细胞活性无显著变化。分别用FMDV感染野生型与敲除型细胞后,检测发现ALKBH5敲除可显著提升病毒2C蛋白表达、病毒RNA转录水平及病毒滴度,表明其敲除促进FMDV复制。进一步的酶活性回补试验显示,回补野生型ALKBH5可抑制病毒复制,而其酶活性关键位点突变体(R131A)则丧失该抑制能力,证明ALKBH5对FMDV复制的抑制作用依赖其去甲基化酶活性。本研究揭示ALKBH5作为宿主限制因子,通过m6A去甲基化负调控FMDV复制,为深入解析病毒感染机制及开发抗病毒新药物提供了理论依据。
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