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CHO细胞表达重组猪干扰素-γ及其抗病毒活性

文献类型： 中文期刊

作者： 王凌云;郝荣增;杨洋;李亚军;卢炳州;毛玉涵;张越;龚真莉;刘艳红;齐萌;茹毅;郑海学

作者机构：

关键词： 猪干扰素γ;塞内卡病毒A;中国仓鼠卵巢（CHO）细胞;蛋白表达与纯化;抗病毒活性

期刊名称：生物工程学报

ISSN： 1000-3061

年卷期： 2023 年

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2023版）

摘要： 为利用中国仓鼠卵巢（Chinese hamster ovarian， CHO）细胞表达系统制备重组猪IFN-γ （recombinant porcine interferon gamma， rPoIFN-γ），并分析其体外抗病毒活性。本研究首先构建rPoIFN-γ真核表达质粒pcDNA3.1-PoIFN-γ，转染悬浮培养的CHO细胞，进行上清分泌表达，利用亲和层析纯化目的蛋白，并进行SDS-PAGE和Western blotting鉴定；通过CCK-8实验分析rPoIFN-γ对细胞的毒性，用VSV/PK-15系统检测其抗病毒活性效价；最后分析rPoIFN-γ对塞内卡病毒A （Seneca virus A， SVA）的抗病毒活性及其对细胞内干扰素刺激基因（interferon-stimulated genes， ISGs）和细胞因子的诱导作用。结果显示，本研究利用CHO悬浮细胞表达系统成功制备了纯化的rPoIFN-γ，该rPoIFN-γ对细胞无毒性，VSV/PK-15系统检测其活性效价为5.59×107 U/mg；此外，rPoIFN-γ可诱导细胞内多种ISGs和细胞因子的表达，并显著抑制SVA的复制。总之，本研究成功利用CHO表达系统制备了高活性的rPoIFN-γ，并完成其体外对SVA的抗病毒作用分析，为rPoIFN-γ的功能及抗病毒制剂的研究提供了实验材料和基础。

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