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非洲猪瘟病毒E184L蛋白的原核表达及单克隆抗体的制备

文献类型： 中文期刊

作者： 李雪雯;李婷婷;李长尧;焦爽;郑君;荣俊;翁长江

作者机构：

关键词： ASFV;E184L;原核表达;单克隆抗体

期刊名称：中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2023 年

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; ; 科技核心（2023版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 本研究旨在表达非洲猪瘟病毒（ASFV）E184L蛋白（pE184L），并制备单克隆抗体（mAb），为其功能研究提供物质基础。首先，构建出了原核表达质粒pET21a-E184L并表达重组pE184L-His蛋白，使用镍亲和层析的方法对pE184L进行纯化，用纯化后的蛋白对小鼠进行免疫，随后将阳性小鼠进行迫杀并取其脾细胞与SP2/0细胞进行融合，经间接ELISA方法筛选出能稳定分泌pE184L mAb的杂交瘤细胞。Western blot结果该抗体能够特异性识别过表达的外源pE184蛋白以及ASFV感染猪肺泡巨噬细胞（PAMs）表达的内源pE184蛋白。IFA结果表明该株mAb能特异性标记过表达的pE184L蛋白及在ASFV感染的PAMs细胞中表达的内源pE184L蛋白。Co-IP试验结果表明该株mAb能特异性结合过表达的pE184L蛋白及在ASFV感染的PAMs细胞中表达的内源pE184L蛋白。本研究成功表达并纯化了可溶性E184L蛋白，并制备了一株pE184L mAb，该mAb与pE184L蛋白具有良好的反应性，这为ASFV pE184L的生物学功能研究奠定了基础。

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