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核酸杂交技术在禽白血病病毒TCID_(50)测定中的应用

文献类型： 中文期刊

作者： 孟凡峰;范建华;徐步;时建蓬;董宣;崔治中;赵鹏

作者机构：

关键词： J亚群禽白血病病毒;斑点杂交;间接免疫荧光试验;酶联免疫吸附试验;TCID50

期刊名称：中国家禽

ISSN： 1004-6364

年卷期： 2015 年 37 卷 01 期

页码： 13-16

收录情况： 北大核心

摘要： 为探索核酸杂交技术在测定J亚群禽白血病病毒(ALV-J)细胞半数感染量(TCID50)中的可行性,将ALV-J传染性克隆r NX0101株以10倍梯度稀释后按常规方法接种已长满单层鸡胚成纤维细胞(CEF)的96孔板,在维持7 d后收集细胞培养上清。上清液部分按照试剂盒说明书进行p27抗原的ELISA检测,另一部分提取RNA后以鸡致病性外源性禽白血病病毒特异性核酸探针交叉斑点杂交检测试剂盒进行Dot-blot检测,每孔中细胞固定后以ALV-J特异性单克隆抗体进行IFA检测,确定病毒感染孔后按照Reed-Muench法分别计算三种方法测定的TCID50。结果显示ELISA法、IFA法和Dot-blot法在确定病毒感染中能够相互验证和补充,该病毒在CEF的TCID50分别为10-4.7TCID50/0.1 m L、10-5.2TCID50/0.1 m L和10-5.3TCID50/0.1 m L。表明采用Dot-blot法测定ALV-J的TCID50是可行的,不仅能够排除内源性的干扰,并且比ELISA和IFA具有更高的灵敏度。

分类号： S852.65

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