数字农科院2.0

利用酵母双杂交技术筛选和鉴定非洲猪瘟病毒E120R蛋白的互作宿主蛋白

文献类型： 中文期刊

作者： 崔帅;王洋;郭晓宇;陈世钰;蒋亚君;庞忠宝;黄建新;孟凡峰;姜一曈;朱鸿飞;贾红

作者机构：

关键词： 非洲猪瘟病毒（ASFV）;酵母双杂交;E120R蛋白;互作蛋白

期刊名称：中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2022 年 11.0 期

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; ; 科技核心（2021版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 【目的】探讨非洲猪瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）衣壳蛋白E120R在病毒感染中的作用,确定与E120R蛋白互作的宿主蛋白。【方法】将ASFV分离株CADCHN09株E120R基因合成并克隆于pGBKT7表达载体,获得pGBKT7-E120R诱饵质粒,同时构建E120R基因截短表达质粒pGBKT7-E120R-1（1-61位氨基酸）和pGBKT7-E120R-2（62-122位氨基酸）。经毒性和自激活性检测后,通过酵母双杂交技术对骨髓巨噬细胞（BMDMs）cDNA均一化酵母文库进行初步筛选,以获得与ASFV E120R蛋白互作的蛋白。通过NCBI数据库进行序列比对并经免疫共沉淀试验验证,确定互作的宿主蛋白。筛选的宿主蛋白经webgenstal在线分析网站初步进行GO功能和KEGG通路富集分析,以确定所筛选的宿主蛋白参与的生物过程与信号通路。【结果】诱饵质粒pGBKT7-E120R-2无毒性和自激活性,可用于文库筛选。通过酵母双杂交系统从BMDMs cDNA均一化酵母文库中初步筛选到46个阳性克隆并进行回转验证,经NCBI数据库序列比对分析共获得29个宿主蛋白。免疫共沉淀试验结果显示,多聚胞嘧啶结合蛋白2（PCBP2）和干扰素刺激基因15（ISG15）均与E120R蛋白存在互作。GO功能富集分析表明,所筛选的宿主蛋白可参与代谢过程、生物调节、应激反应等生物过程;KEGG通路富集分析表明,这些宿主蛋白可参与抗原呈递、铁死亡和坏死性凋亡等多条信号通路。【结论】ASFV E120R蛋白可与宿主免疫应答、细胞死亡等信号通路相关的多种宿主蛋白互作,为进一步研究ASFV E120R蛋白在病毒感染过程中的作用提供了重要理论依据。

分类号：

  • 相关文献

[1]蛋白激发子Hrip1互作蛋白的筛选及其原核表达. 李书鹏,杨秀芬,袁京京,邱德文. 2017

[2]真菌蛋白激发子PevD1互作蛋白的酵母双杂交筛选及融合蛋白的原核表达. 伍文宪,韩磊,杨秀芬. 2014

[3]蛋白激发子Hrip1结构解析及其互作蛋白的研究. 邱德文,张蕾,黄小琴,刘勇. 2014

[4]小麦TaDREB6转录因子互作蛋白的筛选. 孙海桃,徐兆师,侯建华,于卓,赵月,李连城,陈明,马有志. 2011

[5]传染性法氏囊病病毒VPP5酵母双杂交诱饵载体的构建及互作宿主细胞蛋白的筛选. 王念,张礼洲,陈玉明,卢珍,高立,高玉龙,王永强,高宏雷,刘长军,崔红玉,李凯,王笑梅,祁小乐. 2015

[6]大豆类钙调磷酸酶B亚基GmCBL1互作候选蛋白的筛选. 李林蔚,张双喜,周永斌,裴丽丽,陈明,李连城,马有志,刘生祥,徐兆师. 2015

[7]蛋白质效应子MoHrip2互作蛋白筛选研究进展. 邱德文. 2013

[8]传染性法氏囊病病毒VP4酵母双杂交诱饵载体的构建及互作宿主细胞蛋白的筛选. 王念,陈玉明,张礼洲,高立,卢珍,高玉龙,王永强,高宏雷,刘长军,崔红玉,王笑梅,祁小乐. 2015

[9]大丽轮枝菌及激素处理后棉花酵母双杂交文库的构建. 许艳,李冉,宋健,王丹,周雷,李俊娇,张丹丹,陈捷胤,戴小枫,杨星勇. 2021

[10]红麻花药酵母双杂交cDNA文库的构建与HcPDIL5-2a互作蛋白的筛选. 刘明,王颐宁,郑杰,周步进,刘一丁,廖小芳,周瑞阳. 2023

[11]水稻淀粉调节因子RSR1互作蛋白的筛选及验证. 顾怀应,叶国友,徐兴莉,郭谦麒,刘长华,林悦龙. 2025

[12]人参根系酵母文库构建及PgD14与Pgpht2-1的互作蛋白筛选. 梁浩,孙海,邵财,吕柏辰,曹炜玉,龙泓桔,张亚玉. 2024

[13]拟南芥受体激酶AtCERK1胞外结构域互作蛋白的筛选与验证. 史文炯,付振超,曾洪梅. 2025

[14]基于酵母双杂交系统筛选与鉴定非洲猪瘟病毒M1249L互作因子. 崔帅,王洋,陈世钰,蒋亚君,房立春,庞忠宝,郭晓宇,贾红,朱鸿飞. 2025

[15]非洲猪瘟病毒D250R蛋白生物信息学分析及多克隆抗体制备. 许春梅,邵明珠,王心悦,林佳迪,郭建雄,张祥胤,童德文,梁瑞英,赵晓民. 2022

[16]非洲猪瘟病毒pS273R蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备. 赵改红,李婷婷,张涛清,陈欣,王晓,李长尧,张朝霞,郑君,翁长江. 2021

[17]针对非洲猪瘟病毒K205R基因实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用. 乔思娜,李丽薇,赵款,高飞,周艳君,姜一峰,童武,赵冉,童光志,李国新,董世山. 2022

[18]非洲猪瘟病毒感染后猪外周血淋巴细胞Toll样受体信号通路的lncRNA-mRNA分析. 陈世钰,崔帅,蒋亚君,鑫婷,王洋,郝玉欣,黄建新,郭晓宇,朱鸿飞,吴佳俊,贾红. 2022

[19]柑橘抗溃疡病转录因子CsAP2-09互作蛋白筛选与分析. 祁静静,窦万福,张庆雯,胡安华,陈善春,雷天刚,彭爱红,许兰珍,姚利晓,何永睿,李强. 2020

[20]采用酵母双杂交系统筛选GmDREB5的互作蛋白. 曹新有,刘阳娜,陈明,李连城,陈耀锋. 2009

作者其他论文 更多>>