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猪伪狂犬病病毒gE蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体制备

文献类型： 中文期刊

作者： 李健楠;刘清艳;王娟;邢燕茹;陈荣琳;高硕磊;祝宇翔;杨静怡;祝军;孙英峰;于海

作者机构：

关键词： 猪伪狂犬病病毒;gE蛋白;生物信息学;原核表达;蛋白纯化;多克隆抗体

期刊名称：畜牧与饲料科学

ISSN： 1672-5190

年卷期： 2025 年 46 卷 4 期

页码：

收录情况： 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： [目的]研究猪伪狂犬病病毒gE蛋白的免疫原性,并制备鼠源多克隆抗体。[方法]利用生物信息学软件对猪伪狂犬病病毒gE蛋白进行分析(包括酶切位点、跨膜区域、信号肽、蛋白质物理性质、抗原指数),筛选易于表达的基因片段。通过PCR扩增并测序验证后,构建pCold-I-gE重组质粒。将该质粒转化至BL21感受态细胞中,获得重组表达菌。经IPTG诱导表达后,对重组蛋白进行可溶性分析、鉴定及纯化。以纯化的重组蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,并通过间接ELISA、Western blot和IFA方法检测抗体效价、与重组蛋白的反应性及对病毒感染细胞中天然蛋白的特异性结合能力。[结果]诱导后的重组表达菌在26.4 kDa处出现预期目的条带；重组蛋白主要以包涵体形式表达,可与猪伪狂犬病病毒阳性血清中特异性抗体结合,纯化后条带单一。IFA试验证实,制备的多克隆抗体能特异性识别PRV感染PK-15细胞中的gE蛋白。抗体效价高达1∶102400。[结论]猪伪狂犬病病毒gE蛋白成功表达,具有良好的免疫原性,制备的鼠源多克隆抗体效价较高、特异性较好。

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