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条件性敲除D1133L基因的重组非洲猪瘟病毒的构建及增殖特性

文献类型： 中文期刊

作者： 张婷;冯涛;杨金柯;郝雨;杨行;张大俊;史喜绢;闫文倩;陈玲玲;刘湘涛;郑海学;张克山

作者机构：

关键词： 非洲猪瘟病毒;条件性D1133L基因缺失;重组病毒;增殖特性

期刊名称：畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2023 年 54 卷 02 期

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2023版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 前期研究初步表明非洲猪瘟病毒（ASFV）编码的D1133L基因对ASFV复制至关重要，本研究拟进一步探究D1133L在ASFV复制中的作用。利用同源重组技术结合大肠杆菌lac阻遏操作系统实现条件性敲除D1133L基因，以pUC118为骨架重组转移载体ASFVΔi130,将重组转移载体转染骨髓源巨噬细胞（BMDMs）,以ASFV CN/GS/2018为亲本毒株感染BMDM,在β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）存在的条件下，经绿色荧光和PCR鉴定，获得条件性敲除D1133L重组毒株vD1133Li。利用荧光显微镜观察该重组毒株与亲本毒株在猪肺泡巨噬细胞（PAMs）中的复制差异，利用qPCR技术比较重组病毒与亲本毒株的复制差异，分析vD1133Li在无IPTG情况下回补D1133L蛋白后与在IPTG诱导情况下的复制差异。结果显示：本研究成功构建了条件性敲除D1133L的ASFV重组病毒vD1133Li,重组毒株不表达D1133L,在IPTG诱导下复制能力显著低于亲本毒株；在稳定表达D1133L的MA-104细胞系中，vD1133Li复制能力恢复。综上所述，D1133L基因对于ASFV复制至关重要，试验结果为进一步研究D1133L在ASFV致病中的机制及针对D1133L靶向药物研发提供了研究基础。

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