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PRRSVNsp4基因突变株对β2M表达的影响

文献类型： 中文期刊

作者： 康磊;刘珂;王建忠;尹才;邱亚峰;魏建超;李蓓蓓;邵东华;李宗杰;粟硕;马志永

作者机构：

关键词： PRRSV;Nsp4;β2M;反向遗传平台;突变毒株

期刊名称：南京农业大学学报

ISSN： 1000-2030

年卷期： 2024 年 47 卷 03 期

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： [目的]本试验旨在探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp4基因是否在抑制细胞β2M表达方面发挥关键性作用，以进一步研究PRRSV对抗原递呈的免疫抑制机制。[方法]建立PRRSV的反向遗传平台并成功拯救出PRRSV野生毒株SH2020。根据之前对Nsp4基因不同结构域的研究以及氨基酸位点功能预测，在其DomainⅡ和DomainⅢ分别筛选出3个和5个不同的氨基酸位点，并在病毒感染性克隆质粒上对这些位点进行不同的氨基酸替换突变，再将构建好的感染性克隆质粒转染Marc-145细胞以拯救各个Nsp4突变PRRSV病毒，将拯救的PRRSV病毒以MOI=0.02感染PAM细胞，并通过RT-qPCR和Western blot验证PRRSV Nsp4基因是否能够在PAM细胞β2M表达方面发挥作用。[结果]成功拯救出PRRSV D2-5(Nsp4-A80L)突变毒株，并且在Marc-145细胞上的生长动力学特性与野生毒株SH2020相似；而Nsp4基因其余位点突变则会导致PRRSV生长受到显著抑制从而无法进行试验。Western blot和RT-qPCR试验结果证实PRRSV D2-5毒株能够显著促进β2M在Marc-145和PAM细胞的表达，而野生毒株SH2020则表现出了对β2M表达的抑制作用。[结论]Nsp4基因在PRRSV抑制细胞β2M表达方面发挥重要作用，并且Nsp4-A80L突变能够显著促进β2M的表达。

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