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产单核细胞李斯特菌溶血素基因的克隆及原核表达

文献类型： 中文期刊

作者： 张衍海;白艳艳;张彦明;郑增忍;张宝;童光志

作者机构：

关键词： 产单核细胞李斯特菌;溶血素;hlyA;克隆;表达

期刊名称：中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2008 年 30 卷 11 期

页码： 870-874

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 利用PCR方法扩增产单核细胞李斯特菌(LM)的溶血素基因hlyA,获得一条大小约为1600bp的目的片段,将其与pMD18-T载体连接,经酶切、PCR鉴定,命名为pMD18-T-hlyA。测序结果显示所扩增的hlyA基因与GenBank中发表的hlyA的序列同源性为99%。利用含有BamHⅠ/XhoⅠ酶切位点引物B从pMD18-T-hlyA扩增不含信号肽序列的目的片段B,获得了大小约为1500bp的基因片段,该片段与pET32a表达载体经BamHⅠ/XhoⅠ处理后进行连接,转化BL21受菌体。通过酶切、PCR鉴定及序列测定后获得阳性pET32a-hlyA表达重组质粒,将重组菌用终浓度为0.1mmol/L的IPTG进行诱导表达,结果表明重组菌在诱导2h～3h表达量最高,融合蛋白约占菌体的40%,分子量大小约为80ku;利用LM的阳性血清进行Western blot分析,证实该融合蛋白可以被LM阳性血清所识别,为今后研制针对该蛋白的单克隆抗体和建立间接ELISA诊断方法提供了条件。

分类号： S852.61

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