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甘草酸通过c-Jun氨基末端蛋白激酶通路缓解脂多糖诱导的IPEC-J2细胞炎症反应

文献类型： 中文期刊

作者： 赵潇晗;司玮;赵青余;张军民;赵金山;秦玉昌

作者机构：

关键词： 甘草酸;IPEC-J2细胞;JNK信号通路;抗炎功能

期刊名称：动物营养学报

ISSN： 1006-267X

年卷期： 2023 年

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2023版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 本试验旨在研究甘草酸（GL）缓解脂多糖（LPS）诱导的IPEC-J2细胞炎症的分子机制。选择IPEC-J2细胞作为研究对象,采用CCK-8法检测GL在不同浓度（0、10、50、100、200、500μmol/L）下处理不同时间（12、24、48 h）后的细胞活力,从而确定合适的GL处理条件。试验共设4个组,分别为对照组[IPEC-J2细胞生长24 h后,经二甲基亚砜（DMSO）处理12 h再经杜氏磷酸缓冲液（DPBS）共同处理12 h]、LPS组（IPEC-J2细胞生长24 h后,经DMSO处理12 h再经10μg/mL的LPS共同处理12 h）、GL组（IPEC-J2细胞生长24 h后,经50μmol/L的GL处理12 h再经DPBS共同处理12 h）和GL+LPS组（IPEC-J2细胞生长24 h后,经50μmol/L的GL处理12 h再经10μg/mL的LPS共同处理12 h）。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测LPS和GL处理后细胞上清液中白细胞介素-1β（IL-β）、白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）以及高迁移率族蛋白1（HMGB1）的水平,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测细胞中IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达水平,蛋白质免疫印迹（Western blotting）法和免疫荧光染色法检测细胞中Toll样受体4（TLR4）信号通路相关蛋白的表达水平。结果显示:1)与未添加GL相比,浓度为50μmol/L的GL处理24 h对IPEC-J2细胞活力无显著影响（P＞0.05）,故后续选择浓度为50μmol/L的GL处理24 h作为GL的适宜处理条件。2)与对照组相比,LPS组中IL-6的水平和mRNA表达水平显著升高（P＜0.05）;与LPS组相比,GL+LPS组中IL-6的水平和mRNA表达水平显著降低（P＜0.05）。3)与对照组相比,LPS刺激显著增加了c-Jun氨基末端蛋白激酶1/3（p-JNK1/3）和c-Jun的蛋白表达水平（P＜0.05）;与LPS组相比,GL预处理显著降低了p-JNK1/3和c-Jun的蛋白表达水平（P＜0.05）,但对p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）、核因子-κB p65（NF-κB p65）的蛋白表达水平无显著影响（P＞0.05）。4)LPS组细胞核中磷酸化c-Jun（p-c-Jun）荧光强度显著高于对照组（P＜0.05）,且GL预处理可使细胞核中p-c-Jun荧光强度显著下降（P＜0.05）。综上所述,GL可以通过下调IL-6基因表达以及c-Jun氨基末端蛋白激酶（JNK）信号通路相关蛋白表达,缓解LPS引起的IPEC-J2细胞的炎症反应。

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