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高致病性猪生殖与呼吸综合征病毒感染猪外周血单核细胞cDNA文库的构建

文献类型： 中文期刊

作者： 肖晶;符芳;李海忠;张永欣;柴政;蔡雪辉;宋淑萍;李曦

作者机构：

关键词： 猪生殖与呼吸综合征病毒;外周血单核细胞;cDNA文库

期刊名称：中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2009 年 39 卷 08 期

页码： 669-673

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为应用CloneminerTMcDNA Library Construction Kit构建高致病性猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染猪的外周血单核细胞cDNA文库,以1×105TCID50PRRSV肌肉接种健康猪,攻毒后第3、5、7、9、14、21及28 d分别采集感染猪外周血,分离单核细胞,提取总RNA、mRNA,以mRNA为模板,通过引物Biotin-attB2-Oligo(dT)、SuperScript.ⅡRT合成5′末端具有attB1接头的cDNA。用柱层析方法纯化cDNA,纯化后的cDNA与pDONRTM222载体进行BP重组,于大肠杆菌DH10B转化,进行文库容量测定。结果表明,构建的高致病性PRRSV感染猪外周血单核细胞cDNA文库的库容量为1.36×107CFU,平均插入片段长度大于1 200 bp,重组率为94.3%,为进一步从文库中筛选未知细胞因子及相关基因提供了有效的工具。

分类号： S852.65

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