文献类型： 中文期刊
作者： 张林;吴金恩;任玫;王学飞;李硕;王嘉宁;魏凡华;郭慧琛
作者机构：
关键词： CRISPR/Cas9;RALY基因;基因敲除;口蹄疫病毒
期刊名称：中国兽医科学
ISSN： 1673-4696
年卷期： 2023 年
页码：
收录情况： 北大核心（2020版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2023版） ; ; 农林核心（2020版）
摘要： 利用CRISPR/Cas9技术建立敲除RNA结合蛋白（RALY）基因的PK-15细胞系PK-15-RALY-/-，并初步探究RALY对口蹄疫病毒（FMDV）复制的影响。根据GenBank中猪的RALY基因的外显子，设计合成sgRNA并克隆至PX459载体；将质粒转染PK-15细胞，并采用有限稀释法筛选单克隆细胞株，经Western-blot及测序检测RALY基因的敲除效果。通过RT-qPCR检测FMDV感染PK-15-RALY-/-和PK-15细胞后FMDV mRNA的转录水平，Western-blot检测FMDV-VP0、FMDV-VP3和FMDV-VP1的表达水平，最后检测子代病毒感染力。测序结果证实RALY基因发生了移码突变，且Western-blot无法检测到PK-15-RALY-/-细胞中RALY蛋白的表达。FMDV感染两种细胞后，RT-PCR结果显示，FMDV在PK-15细胞中的mRNA水平显著低于PK-15-RALY-/-细胞，Western-blot结果显示，VP0、VP3和VP1蛋白在PK-15-RALY-/-细胞中的表达显著高于PK-15细胞，病毒感染力测定结果显示，PK-15-RALY-/-细胞中子代病毒滴度显著高于PK-15细胞。上述结果表明，本研究成功构建了RALY基因敲除的PK-15细胞系，首次表明RALY可以抑制FMDV复制，为进一步开展RALY在细胞内调控病毒复制机制研究奠定了基础。
分类号：
- 相关文献
[1]POP基因敲除PK15细胞系的建立及其对口蹄疫病毒增殖的影响. 卢炳州,李建斌,王姿逸,杨洋,赵陇和,李亚军,刘华南,李明桂,马坤,郑海学,郭建宏,茹毅,郝荣增. 2025
[2]利用CRISPR/Cas9技术敲除水稻Pi21基因的效率分析. 范方军,李文奇,朱金燕,王军. 2016
[3]弓形虫MORN2基因敲除株的构建及其表型鉴定. 陈凯,王金磊,白梦捷,杨文彬,黄思扬. 2018
[4]HEK293T细胞敲除TPL2基因促进塞内卡病毒复制的研究. 闫鸣昊,郝军红,张大俊,申超超,徐国伟,侯景,张克山,郑海学,刘湘涛. 2020
[5]敲除RIG-I基因流感病毒高产MDCK细胞系的建立及功能研究. 曾为俊,许曼,王辉,鲁国涛,邵玉乐,陈洪岩,刘建华,孟庆文. 2019
[6]弓形虫ROP5与ROP18的双基因缺失株构建及表型鉴定. 陈芸,刘旗,张曼玉,耿小玲,蒋蔚,王权. 2023
[7]利用CRISPR/Cas9技术敲除CHO-K1细胞中GS基因的研究. 于浩洋,仇松寅,王彩霞,林祥梅,贾红,李昊轩,刘晓飞,冯春燕,吴绍强. 2022
[8]弓形虫四个假定蛋白基因缺失株的构建及其基本生物功能学研究. 王沛,王萌,李婷婷,郑晓楠,梁勤立,陈小庆. 2022
[9]敲除ATG5基因Vero-SN细胞系的建立. 刘迪一,陈炳春,杨雪,王会宝,殷相平,任善会,窦永喜. 2025
[10]TRIF敲除NA与BHK-21细胞系的构建及对狂犬病病毒增殖效率的影响. 黄伟涛,李家琪,彭瑶,殷相平,郭霄峰,罗均. 2025
[11]基于CRISPR/Cas9技术构建猪GRSF1基因敲除细胞系及其对细胞活性的影响分析. 杜鹏飞,彭听雨,范双旗,郑海学,朱紫祥,陈金顶. 2025
[12]PK-15细胞的TPL2基因敲除有利于口蹄疫病毒和塞内卡病毒复制. 闫鸣昊,郝军红,张大俊,申超超,徐国伟,侯景,张克山,郑海学,刘湘涛. 2020
[13]宿主蛋白HERC4影响口蹄疫病毒复制的作用研究. 郑东东,冯涛,郝荣增,杨彪,晏子龙,齐晓兰,郑海学. 2024
[14]Tollip敲除猪肾细胞系的构建. 王家丽,杨帆,邵文华,黄梦瑶,曹伟军,蒲秀瑛,张伟,郑海学. 2024
[15]CISD2敲除细胞系的构建及其对口蹄疫病毒复制的影响. 陈治彤,张伟,蔡建涛,吕岳芹,刘泓屹,曹伟军,顾有方,郑海学,杨帆. 2025
[16]EphA2基因敲除和过表达BHK-21细胞系的构建及其对口蹄疫病毒复制的影响. 李熙忠,范许许,朱兆宇,裴丹诗,王一卓,何路,任青峰,郑海学,李伟伟,郜原. 2025
[17]RAB20基因敲除PK-15细胞系的构建及其对口蹄疫病毒复制的影响. 蔡建涛,张伟,陈治彤,刘泓屹,吕岳芹,曹伟军,冷非凡,杨帆,郑海学. 2025
[18]猪源TRAF3基因编辑细胞系的构建及缺失表型研究. 邵文华,杨帆,曹伟军,陈创伟,王伟,郑海学,张伟,朱紫祥,赵宗胜. 2025
[19]宿主蛋白TRIM7对口蹄疫病毒复制的影响. 刘泓屹,张伟,蔡建涛,古涛鸣,王良锋,陈治彤,曹伟军,郑海学,杨帆,张桂红. 2025
[20]CRISPR/Cas9介导的JMJD6基因敲除细胞系的建立及其应用. 周婷婷,杨帆,杨洋,齐晓兰,邵文华,黄梦瑶,董星艳,陈治彤,刘泓屹,蔡建涛,曹伟军,蒲秀瑛,张伟,郑海学. 2025
作者其他论文 更多>>
-
基于杆状病毒-昆虫细胞表达伪狂犬病病毒 gB蛋白及其免疫效果评价
作者：王金;王锴;张莹;谭书桢;孙世琪;郭慧琛;尹双辉;牛家强
关键词：昆虫细胞表达;伪狂犬病病毒;gB蛋白;小鼠;免疫评价
-
基于透明质酸的口蹄疫矿化病毒样颗粒水凝胶疫苗的构建及其免疫效果评价
作者：张铭洋;张生英;马海燕;刘一凡;滕志东;孙世琪;郭慧琛;曾小英;周静静
关键词：口蹄疫病毒样颗粒;生物矿化;透明质酸;水凝胶疫苗
-
口蹄疫矿化病毒样颗粒疫苗对猪免疫持续期的评价
作者：段梦迪;刘蕾;李毅;穆素雨;滕志东;张韵;丁耀忠;孙世琪;郭慧琛;敬晓棋;白满元
关键词：口蹄疫病毒;病毒样颗粒;生物矿化;免疫持续期
-
口蹄疫病毒146S抗原特异性抗体的制备及生物学特性分析
作者：刘仲元;南栩;谭书桢;秦峰;董虎;张韵;郭慧琛;孙世琪;徐业芬
关键词：口蹄疫病毒;146S抗原;纳米抗体
-
口蹄疫病毒O型中和单克隆抗体的制备及其抗原表位鉴定
作者：孙悦;邵军军;高闪电;周广青;郭慧琛;常惠芸;张勇;赵兴绪;刘伟
关键词：口蹄疫病毒;血清型;VP1;中和抗体;表位鉴定
-
口蹄疫病毒样颗粒在毕赤酵母中的表达与鉴定
作者：李志要;尹双辉;郭慧琛;鲍恩东
关键词：口蹄疫病毒;病毒样颗粒;真核表达;毕赤酵母
-
磷酸钙矿化口蹄疫病毒样颗粒工艺优化及免疫原性评价
作者：任丽华;郭伟;谢茜茜;刘瑞鹏;孙世琪;董虎;张韵;白满元;郭慧琛;滕志东
关键词：口蹄疫;病毒样颗粒;磷酸钙矿化;反应条件;免疫原性