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实验动物弓形虫荧光定量PCR检测方法的建立及应用

文献类型： 中文期刊

作者： 罗霆宇;李凯丽;李昌文;陈洪岩;夏长友;高彩霞

作者机构：

关键词： 弓形虫;荧光定量PCR;应用

期刊名称：实验动物科学

ISSN： 1006-6179

年卷期： 2024 年 41 卷 4 期

页码：

收录情况： 科技核心（2024版）

摘要： 目的建立实验动物弓形虫TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法,并对其进行初步应用。方法通过比对美国国家生物技术信息中心(NCBI)发表的弓形虫各毒株序列,选取其529 bp重复序列保守区域设计引物探针,建立弓形虫的荧光定量PCR方法。随后对方法的特异性和敏感性进行检验；取浓度为10^(6)~10^(2)copies/μL 10倍系列稀释的质粒标准品,每个浓度做3个平行,重复检测3次,计算组内和组间变异系数,评估方法的重复性和稳定性；用建立的荧光定量PCR方法及国标推荐的PCR方法检测14份犬组织样品和66份猪全血样品,以评估此方法在实际应用中的检测能力。结果建立的弓形虫荧光定量PCR方法在10^(8)~10^(1)copies/μL范围Ct值与质粒浓度呈线性关系,标准曲线Slope为-3.285,R^(2)值为1,扩增效率为10^(1).663%。可检测到的弓形虫最低浓度为10^(1)copies/μL；与其他14种实验猪常见病原不发生交叉反应；重复检测10^(6)~10^(2)copies/μL质粒标准品,组内变异系数小于1.21%,组间变异系数小于0.62%。用建立的弓形虫荧光定量PCR方法和国标PCR方法对14份犬组织样品和66份猪全血样品进行检测,结果显示,弓形虫荧光定量PCR方法和国标PCR方法检测的阳性率分别为10%(8/80)和7.5%(6/80),阳性符合率达到100%。结论建立的弓形虫荧光定量PCR方法可以有效地检测弓形虫,为实验动物弓形虫日常监测提供良好的方法。

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