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基于微滴式数字PCR检测牛病毒性腹泻病毒方法的建立及初步应用

文献类型： 中文期刊

作者： 刘芯怡;李丹;秦刚;陈俊贞;付强;史慧君

作者机构：

关键词： 牛病毒性腹泻病毒(BVDV);微滴式数字PCR(ddPCR);实时荧光定量PCR(qPCR);灵敏性;特异性;重复性

期刊名称：农业生物技术学报

ISSN： 1674-7968

年卷期： 2025 年 33 卷 01 期

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus, BVDV)是引起犊牛(Bos sp.)病毒性腹泻的主要病原之一，导致犊牛免疫力降低，患病率和死亡率升高。目前对BVDV常用的检测方法存在灵敏度较低、容易出现假阳性等状况。本研究基于微滴式数字PCR(droplet digital PCR, ddPCR)技术，建立BVDV精准检测技术。首先针对BVDV 5'UTR基因保守序列区域设计引物和探针，合成BVDV 5'UTR基因并构建质粒标准品。使用BVDV质粒标准品分别建立实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR, qPCR)和ddPCR检测方法，并优化其反应参数和条件，分析其灵敏度、特异性和重复性，并进行了临床应用。结果显示，本研究建立的qPCR方法中，最佳引物和探针浓度分别为300和500 nmol/L，标准曲线呈良好的线性关系，最低检测下限为1×10～4 copies/μL，具有良好的特异性和重复性。建立的ddPCR方法中，最低检测下限为0.64 copies/μL，比qPCR灵敏性高15 625倍，该方法具有良好的特异性和重复性...

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