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鸡β防御素1基因密码子优化及其在真核细胞中的表达

文献类型： 中文期刊

作者： 单艳菊;胡艳;徐文娟;束婧婷;朱春红;李慧芳;陈宽维

作者机构：

关键词： 鸡;β防御素1;密码子优化;毕赤酵母;表达

期刊名称：云南农业大学学报(自然科学)

ISSN： 1004-390X

年卷期： 2012 年 27 卷 06 期

页码： 833-839

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 鸡β防御素1在鸡防御系统中起重要作用,为实现其在真核细胞中的表达,本研究利用RT-PCR从狼山鸡法氏囊中扩增出鸡β防御素1成熟肽基因,同时参照酵母密码子的偏好性,设计合成Gal-1成熟肽片段新基因,并在其3'端添加6×His序列以检测鸡β防御素1的表达情况,分别构建分泌型表达载体pPIC9K-Gal-1和pPIC9K-Gal-1-a-His,线性化后电转化导入毕赤酵母菌株GS115,G418抗性筛选高拷贝转化子,阳性克隆用甲醇诱导,Tricine-SDS-PAGE分析和Western-blotting鉴定表达上清液。结果表明,从狼山鸡法氏囊中扩增出鸡β防御素1成熟肽基因,其序列与GenBank登录号AF033335的序列同源性为100%;Gal-1和Gal-1-a-His基因均成功整合到毕赤酵母基因组中,重组酵母蛋白Gal-1-His获得了成功表达。本研究为后续鸡β防御素1的高效表达和生物学活性研究奠定了基础。

分类号： S831`Q78

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