文献类型： 中文期刊
作者： 梁玉斌;马雪青;何宜轩;王彩荷;李坤;李平花;付元芳;卢曾军;杜晓华;刘霞;孙普
作者机构：
关键词： 塞内卡病毒A;竞争ELISA;中和抗体;诊断检测
期刊名称：生物工程学报
ISSN： 1000-3061
年卷期： 2025 年
页码：
收录情况： EI（2025版） ; ; 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版）
摘要： 塞内卡病毒病是由塞内卡病毒A(Senecavirus A， SVA)引起的一种主要感染猪的病毒性传染病，监测其流行情况对防控具有重要意义。为了建立一种快速检测SVA中和抗体的ELISA检测方法，本研究利用HEK293F细胞表达SVA特异性猪源Fab(fragment of antigen binding， Fab)抗体，经间接ELISA、免疫荧光试验(immunofluorescence assay， IFA)、病毒中和实验(virus neutralization test， VNT)、蛋白免疫印迹(Western blotting， WB)等方法验证Fab抗体的生物学活性，将其用生物素标记后作为竞争抗体，以竞争ELISA(competitive ELISA， C-ELISA)反应模式建立一种SVA中和抗体C-ELISA检测方法，并对其敏感性、特异性、重复性、与VNT的符合率进行测定。结果表明，成功制备了1株具有中和活性的Fab抗体，且与SVA之间有较高的亲和力，将其命名为1M33Fab，用生物素标记后命名为Bio-1M33Fab；确定C-ELISA方法的SVA粒子最佳包被浓度为1 μg/mL、Bio-1M33Fab最适工作浓度为0.5 μg/mL、待检血清样本最佳稀释比例为1∶10、酶标亲和素最佳稀释比为1∶30 000；确定抑制百分率(percent inhibition， PI)为47%时，敏感性和特异性最高，分别为96.88%和100%，且与常见的主要猪病毒病阳性血清不发生交叉反应；批内变异系数范围为1.12%-7.34%、批间变异系数范围为1.10%-8.97%，表明重复性较好；利用该方法和VNT同时检测了224份临床猪血清样本，两种方法的符合率为93.75%。本研究利用SVA猪源Fab抗体成功建立了一种检测SVA中和抗体的C-ELISA方法，这为开发检测试剂盒产品奠定了基础。
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