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牛结节性皮肤病病毒ORF141蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

文献类型： 中文期刊

作者： 张慧;何小兵;房永祥;谭金龙;余翰维;高真贞;景伟;苏洋;陈国华;景志忠

作者机构：

关键词： 牛结节性皮肤病病毒;ORF141基因;原核表达;多克隆抗体

期刊名称：中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2024 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 为获得牛结节性皮肤病病毒(lumpyskindiseasevirus，LSDV)ORF141蛋白及其多克隆抗体，本研究参照GenBank收录的LSDVORF141基因序列，利用SnapGene软件设计引物，以LSDV基因组为模板，利用PCR扩增ORF141基因，构建原核表达重组质粒pET-30a(+)-ORF141，转化至Rosseta大肠杆菌表达细胞中，用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达，然后利用SDS-PAGE和Western-blot对目标蛋白进行鉴定，用该蛋白免疫新西兰大白兔，利用免疫荧光试验确定多克隆抗体的特性。结果表明，本研究成功的构建了pET-30a(+)-ORF141原核表达载体，在1 mmol/L IPTG、37 ℃条件下诱导表达目的蛋白，大小约25 ku，主要以包涵体的形式存在；制备的抗LSDV ORF141多克隆抗体的效价可达1∶409 600，免疫荧光试验表明其能够识别LSDV病毒中ORF141编码的天然蛋白，这为后续明确LSDV ORF141基因编码蛋白的生物学功能研究奠定了基础。

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