文献类型： 中文期刊
作者： 杨宇轩;袁红;焦云娟;王涛;高洁;李坤;李平花;孙普;卢曾军;白兴文;郜原
作者机构：
关键词： FGF21;骆驼;原核表达;多克隆抗体
期刊名称：中国兽医科学
ISSN： 1673-4696
年卷期： 2024 年
页码：
收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2020版）
摘要： 本研究旨在为深入研究骆驼成纤维细胞生长因子21(FGF21)调节糖脂代谢的作用机制提供蛋白和抗体材料。在NCBI数据库中检索骆驼FGF21基因序列 (XM＿010996368.2)，删除信号肽区段后合成携带His标签的FGF21全长基因，通过EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切位点嵌入pET-28a(+)表达载体，获得重组表达质粒pET-28a(+)-FGF21-His，转入大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行重组蛋白FGF21的表达，通过镍离子亲和层析柱纯化重组蛋白，利用SDS-PAGE和Western-blot鉴定纯化的重组蛋白。将重组蛋白FGF21与弗氏佐剂混合乳化后免疫新西兰大白兔，制备兔源多克隆抗血清，利用protein A亲和层析纯化柱纯化多克隆抗体，利用SDS-PAGE技术分析纯化多克隆抗体的纯度，利用Western-blot和间接ELSIA方法验证纯化多克隆抗体的反应性。结果表明，成功表达并纯化出骆驼重组蛋白FGF21，以其免疫家兔后制备并纯化出抗FGF21的特异性多克隆抗体。本研究为建立ELISA方法检测骆驼FGF21蛋白提供了材料，为阐明FGF21在骆驼糖脂代谢中的功能机制奠定了基础。
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