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布鲁氏菌热休克蛋白GroEL基因缺失及过表达菌株的构建及生长特性鉴定

文献类型： 中文期刊

作者： 张瑜瑜;张粟子;李娜;牟雪梅;支飞杰;冉多良;储岳峰;李斌;许健

作者机构：

关键词： 布鲁氏菌;热休克蛋白;GroEL基因;缺失株;过表达株

期刊名称：中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2025 年 12 期

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 【目的】探究热休克蛋白GroEL对布鲁氏菌体外生长的影响及其在巨噬细胞定位情况,为研究GroEL基因的生物学功能奠定基础。【方法】采用同源重组及SacB反向筛选技术,以牛种布鲁氏菌(Brucella abortus)A19株为研究对象,构建牛种布鲁氏菌A19株GroEL基因缺失株(A19ΔGroEL)和过表达株(A19-HA/GroEL);绘制GroEL基因缺失菌株及过表达菌株的体外生长曲线,检测GroEL对布鲁氏菌体外生长的影响,采用间接免疫荧光试验检测GroEL在RAW264.7巨噬细胞中的定位,并通过免疫电镜观察GroEL在布鲁氏菌中定位。【结果】PCR结果显示,扩增出了大小为1 520 bp的特异性条带,表明GroEL基因缺失株A19ΔGroEL构建成功。Western blotting结果显示,获得了大小为60.2 ku的目的条带,表明过表达株A19-HA/GroEL构建成功。细菌生长曲线结果显示,牛种布鲁氏菌A19、A19ΔGroEL和A19-HA/GroEL的体外生长趋势无显著差异(P>0.05)。间接免疫荧光试验结果显示,GroEL主要定位于RAW264.7巨噬细胞的胞质中。免疫电镜观察结果显示,GroEL主要定位于布鲁氏菌的外膜和内膜。【结论】本研究成功构建了布鲁氏菌GroEL基因缺失株和过表达株,揭示了GroEL基因的缺失不影响布鲁氏菌的体外生长,且GroEL主要定位于RAW264.7巨噬细胞的细胞质和布鲁氏菌的外膜和内膜,为深入探究GroEL的生物学功能提供了理论基础和数据支持。

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