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产气荚膜梭菌β2毒素抗体竞争ELISA检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 赵佳慧;马祎芳;李学瑞;高鹏程;狄娜;郑福英;储岳峰

作者机构：

关键词： 产气荚膜梭菌;β2重组蛋白;单克隆抗体;竞争ELISA;抗体检测

期刊名称：中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2025 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 为检测产气荚膜梭菌（Cp）β2毒素抗体，合成产气荚膜梭菌β2毒素基因并插入pET-32a载体，诱导表达后得到Cp β2毒素重组蛋白，以纯化的Cp β2毒素重组蛋白为包被抗原，Cp β2毒素单抗2A4为竞争性抗体与绵羊血清竞争性反应，HRP-山羊抗鼠IgG为二抗，建立并优化Cp β2毒素抗体的竞争ELISA检测方法。结果显示，蛋白包被浓度为1.5 μg/mL，待检血清不稀释，二抗1∶20 000稀释，避光显色15 min为最优反应条件。所建方法的阴性临界值为31.44%，阳性临界值为37.65%，检测阳性血清敏感度为1∶64，批间、批内试验变异系数均小于10%。与Cp的α、β1、ε毒素，腐败梭菌以及大肠杆菌阳性血清均无非特异性反应。检测200份临床绵羊血清样品，该竞争ELISA方法与间接ELISA方法的阳性符合率为85.7%，阴性符合率为95.9%，总符合率为92%。检测100份牛血清，符合率为100%。结果表明，本试验所建方法具有良好的重复性、特异性和敏感性，可以用于检测动物体内是否存在针对Cp β2毒素的抗体，为评估动物是否感染Cp提供了有效手段，并在Cp的流行病学调查及疫苗免疫效果评价中具有广阔的应用前景。

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