文献类型： 中文期刊
作者： 张一帆;陈胜利;金祥瑞;金珊宇;梁晋嘉;兰仕梅;李章程;储岳峰;史耀旭;郝华芳
作者机构：
关键词： 山羊支原体山羊肺炎亚种;山羊传染性胸膜肺炎;HP65蛋白;原核表达;间接ELISA
期刊名称：中国兽医科学
ISSN： 1673-4696
年卷期： 2025 年
页码：
收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）
摘要： 为建立山羊支原体山羊肺炎亚种（Mccp）的抗体检测方法，筛选Mccp潜在诊断靶标——假定膜蛋白HP65，以纯化的rHP65蛋白为包被抗原，通过优化条件，建立间接ELISA抗体检测方法，并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行评估和临床应用。结果显示，rHP65蛋白大小约72 kDa；Western-blot证实该蛋白与Mccp阳性血清具有良好的反应性。建立的ELISA方法的最佳条件为：抗原包被量为180 ng/孔，37℃孵育2 h后4℃过夜包被，10 g/L BSA 37℃封闭90 min，血清1∶200稀释后37℃孵育1 h，酶标二抗1∶10 000稀释后37℃孵育1 h；底物在37℃显色10 min。与绵羊肺炎支原体、山羊支原体山羊亚种、丝状支原体山羊亚种、小反刍兽疫病毒和衣原体的阳性血清均无交叉反应，具有良好的特异性，敏感性达1∶10240。批内和批间重复性变异系数均低于10%。应用该方法对Mccp免疫、感染血清和临床血清进行检测，疫苗免疫7 d可检测到血清抗体转阳、人工感染血清7～14 d可检测到血清阳性，187份临床血清中有102份阳性、85份阴性。以上结果表明，基于HP65蛋白建立的ELISA方法可用于山羊传染性胸膜肺炎疫苗免疫抗体检测，为该病临床诊断试剂盒开发奠定了基础。
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