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核酸提取方法、操作人员和扩增仪器对RT-qPCR检测结果的影响

文献类型： 中文期刊

作者： 马玥;高维明;王江璐;史楠;王思文;邢文萍;武嘉男;王秀荣

作者机构：

关键词： 实时荧光定量RT-PCR;核酸扩增;影响因素;变异系数

期刊名称：中国动物检疫

ISSN： 1005-944X

年卷期： 2025 年 42 卷 09 期

页码：

收录情况： 农林核心（2024版）

摘要： 为探讨方法、人员和仪器对实时荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)检测结果的影响，以灭活的H5亚型禽流感病毒Re-12株鸡胚尿囊液作为核酸提取和扩增样品，在固定其他变量的条件下，分别用3种核酸提取试剂盒，由3位操作人员使用7种品牌的扩增仪器进行RT-qPCR检测，并对检测结果进行对比分析。结果显示：3种核酸提取试剂盒获取RNA进行RT-qPCR检测的平均Ct值极差为3.69,3位操作人员测试的Ct值变异系数为2.82%～4.84%,7种品牌仪器测试的Ct值变异系数为4.36%～10.28%。结果说明：不同核酸提取试剂盒、不同操作人员和不同检测仪器都会引起检测结果差异，对检测结果产生影响。因此，在进行核酸检测时，必须严格遵守试验规程，确保试验条件的稳定性和一致性，以获得准确可靠的检测结果。

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