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羊口疮病毒ORF011蛋白B细胞抗原表位的生物信息学分析及其多克隆抗体的制备

文献类型： 中文期刊

作者： 杨毅;阿安拉木;王成财;杨佩瑶;王小龙;杜新潮;陈韵;窦永喜;任善会;张学勇;李志;付永;沈秀英;郭志宏;高小龙;朵红

作者机构：

关键词： 羊口疮病毒;ORFV ORF011蛋白;B细胞表位;多克隆抗体

期刊名称：中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2025 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 本试验旨在制备抗羊口疮病毒(ORFV)ORF011蛋白的多克隆抗体，为ORFV的致病机制和疫苗防控研究提供生物学材料。利用SVMTriP和IEDB在线生物信息学分析软件预测ORFV ORF011蛋白序列的B细胞抗原表位，发现ORFV ORF011蛋白存在多个B细胞抗原表位。PCR扩增ORFV ORF011全长基因，连接至经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后的载体pET-28a上构建原核表达重组质粒，将构建成功的重组质粒(pET28a-ORFV-ORF011)转化Rosetta感受态细胞，经IPTG诱导成功表达ORF011蛋白，该蛋白主要以包涵体形式存在。ORF011蛋白的最佳诱导表达条件为37 ℃，IPTG最佳浓度为0.5 mmol/L，最佳诱导时间为12 h。目的蛋白经变性、复性纯化后免疫小鼠获得的多克隆抗体，证实具有良好的特异性，抗体效价可达1∶256 000，中和病毒活性可达1∶400。本试验证实ORFV ORF011蛋白是良好的抗原和免疫原，能够诱导BALB/c小鼠产生具有中和活性的多克隆抗体，在羊口疮诊断试剂和疫苗研制中具有重要应用价值。

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