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靶向牛痘病毒ORF003基因SYBR Green荧光定量PCR检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 张强蓉;任善会;王会宝;高小龙;杨雪;王小龙;赵立磊;陈豪泰;孙跃峰;万学瑞

作者机构：

关键词： 牛痘病毒;ORF003基因;荧光定量PCR;检测方法

期刊名称：中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2025 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 基于牛痘病毒（VACV）的基因组序列，建立靶向VACV ORF003基因的荧光定量PCR检测方法。基于VACV全基因序列设计、筛选了1对荧光定量PCR引物，并进行特异性和灵敏性的检测；根据改造VACV毒株的ORF003基因序列，设计普通PCR引物，扩增VACV ORF003基因，构建真核表达载体，建立荧光定量PCR标准曲线。筛选得到一对靶向于VACV ORF003基因的特异性qPCR引物；构建了pCAGGS-VACV ORF003真核表达质粒，建立了标准曲线Y = -3.52x + 49.371，线性相关系数R2 = 0.9977，扩增效率为102.8%；验证性实验结果显示该引物最低检测限为4.49拷贝数/μL，各批次内与批次间重复性结果的变异系数均小于2%，表明其具有特异性强、重复性好和灵敏度高的优点。成功建立了靶向VACV ORF003基因的特异性荧光定量PCR检测方法，应用于VACV感染细胞和动物模型中病毒含量的测定，助力猴痘等痘病毒药物研发。

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