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南极莫氏黑粉菌热激蛋白70家族启动子鉴定及活性比较

文献类型： 中文期刊

作者： 张聪;郭利桃;董国云;李毅;李新文;张政兵;林宇丰;侯春生;李智敏

作者机构：

关键词： 南极莫氏黑粉菌;热激蛋白70家族;启动子活性;遗传转化;增强型绿色荧光蛋白

期刊名称：微生物学通报

ISSN： 0253-2654

年卷期： 2024 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2024版）

摘要： 【背景】南极莫氏黑粉菌(Moesziomyces antarcticus)由于能够产生优良的生物表面活性剂和脂酶而被深入研究，但目前仍缺乏遗传操作相关的基因表达元件。【目的】检测南极莫氏黑粉菌热激蛋白70超家族全部7个基因的启动子表达活性，明确该菌中不同热激蛋白70家族成员的启动子活性差异，并筛选出可用于调控南极莫氏黑粉菌基因表达的强启动子。【方法】通过基因组数据库获得南极莫氏黑粉菌JCM10317菌株中7个热激蛋白70家族成员的基因信息，利用生物信息学方法进行热激蛋白70家族进化分析并预测热激蛋白70启动子(PHsp70)序列中的关键顺式作用元件，然后构建7个热激蛋白70启动子连接增强型绿色荧光蛋白基因的重组表达载体，通过测定阳性转化子荧光值和荧光显微观察比较不同热激蛋白70家族成员启动子的活性差异。【结果】蛋白进化分析表明7个热激蛋白70家族成员分别属于不同亚家族，并且各成员启动子中的顺式作用元件种类和数量也具有明显差异。此外，以PHsp701、PHsp702、PHsp703、PHsp704，PHsp705、PHsp706、PHsp707构建的重组质粒转化BDH3-1菌株所获得的阳性转化子平均荧光值分别为对照的12.7、1.6、2.9、5.8、4.6、5.0和1.5倍，与荧光显微观察结果一致。【结论】根据生物信息学分析及绿色荧光蛋白表达结果发现，南极莫氏黑粉菌热激蛋白70家族不同成员间的启动子活性差异显著，其中PHsp701的活性最高，是南极莫氏黑粉菌中的强启动子，PHsp704、PHsp705、PHsp706启动子活性次之，可作为备选的启动子用于后续研究。

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