文献类型： 中文期刊
作者： 兰德松;石星明;王云峰;刘长军;王玫;崔红玉;田国彬;李继松;童光志
作者机构：
关键词： 火鸡疱疹病毒;细菌人工染色体;Red/ET克隆;禽流感病毒;HA基因
期刊名称：微生物学报
ISSN： 0001-6209
年卷期： 2009 年 49 卷 1 期
页码： 78-84
收录情况： CSCD
摘要： [目的]本研究以火鸡疱疹病毒(HVT)BAC分子克隆为平台,构建表达禽流感HA基因的重组火鸡疱疹病毒,以开发新型病毒活载体疫苗.[方法]利用Red/ET重组技术,经过两步法重组:第一步,用两端带有50bp大小左、右同源臂a和b的选择标记基因rpsL-neo表达盒替换HVT基因组Uhs2区;第二步,用两端带有同样的50 bp左、右同源臂a和b的HA基因表达盒替换选择标记基因rpsL-neo表达盒.在含有氯霉素和链霉素双抗性的平板上筛选阳性克隆,经卡那霉素抗性反向筛选和PCR进一步鉴定,鉴定正确的克隆命名为pHVT-HA.提取并纯化pHVT-HA DNA,转染原代鸡胚成纤维细胞(CEF),以完成重组病毒的拯救.[结果]命名为pHVT-HA3的BAC克隆转染CEF后第4天,出现病毒噬斑,噬斑形态与野生型HVT相似,获得拯救的重组病毒,命名为rHVT-HA3,将重组病毒rHVT-HA3在CEF上连续传代培养,经FCR和间接免疫荧光检测表明,重组病毒在连续传代过程中仍能稳定表达HA蛋白.[结论]本研究以HVT BAC为平台,利用Red/ET重组技术,构建了表达禽流感A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)毒株的血凝素(HA)基因的重组火鸡疱疹病毒,为新型禽流感重组活载体疫苗开发奠定基础.
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