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犬少突胶质前体细胞的制备及嗜神经病毒感染模型的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 杨晓媛;薛雨佳;杜文乐;崔赛赛;刘家森;康洪涛;姜骞;曲连东

作者机构：

关键词： 少突胶质前体细胞(OPC);原代细胞培养;犬;嗜神经病毒

期刊名称：中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2025 年 47 卷 4 期

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 为建立研究嗜神经病毒致病机制的可靠细胞模型,本实验将健康幼犬剖杀无菌去除其脑膜、脑干及血管等结构,收集并处理大脑皮质后,利用神经组织解离试剂盒及配套设备对大脑组织解离,采用3次差速贴壁法从犬大脑皮质中纯化细胞。3次贴壁后观察可见,贴壁细胞体积较大,突起数量增加,突起变长有分支,分支呈交叉状态。进一步采用间接免疫荧光试验(IFA)和RT-PCR鉴定纯化后的细胞,结果显示,纯化的细胞中少突胶质前体细胞标记物CSPG4抗体和基因检测均为阳性,而其他细胞标记物的抗体和基因检测均为阴性,表明获得了纯化的犬少突胶质前体细胞(OPC),纯度约97%。对分离纯化后的OPC采用PCR/RT-PCR检测常见犬外源病毒,结果显示,犬瘟热病毒(CDV)、犬副流感病毒5型(CPIV5)、犬细小病毒(CPV)均为阴性结果,表明获得的OPC无常见犬外源病毒感染。将犬源嗜神经病毒CDV和CPIV5分别感染OPC,感染后24 h和48 h观察细胞形态,并采用IFA鉴定两种病毒的感染状况。细胞形态观察可见,接种CDV 24 h出现细胞病变,48 h后的细胞病变更为明显,大部分细胞圆缩、聚堆、甚至脱落；接种CPIV524 h的细胞无明显病变,48 h出现圆缩、聚堆,但无明显脱落,与自然感染的细胞形态一致。IFA结果显示,CDV和CPIV5感染的细胞均出现绿色荧光,但CDV感染细胞出现的绿色荧光多于CPIV5感染的细胞。上述结果表明犬源OPC可作为CDV、CPIV5等嗜神经病毒感染的细胞模型。本研究获得了犬大脑皮质OPC的体外分离、纯化及培养方法,建立了嗜神经病毒感染的细胞模型,为该类病毒致病机制的研究奠定了实验基础。

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