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葡萄座腔菌原生质体的制备及gfp的转化(英文)

文献类型： 中文期刊

作者： 陈亮;孙庚午;王洪凯;吴树敬;林福呈;刘会香

作者机构：

关键词： 葡萄座腔菌;原生质体制备;再生;转化;gfp

期刊名称：林业科学

ISSN： 1001-7488

年卷期： 2014 年 50 卷 06 期

页码： 131-137

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 葡萄座腔菌是木本植物溃疡类病害的重要病原,研究该病菌的侵染和致病过程有助于揭示病原与寄主的互作机制。携带gfp基因并高效表达的病菌可有效地实时检测和分析病菌的侵染过程,但由于该病菌在致病和室内培养过程中均不易产孢,因此,制备高质量的原生质体是进行gfp基因转化和表达的首要步骤。通过对酶的种类、酶解液浓度、菌丝年龄、酶解时间、酶解温度和渗透压稳定剂6个可能影响原生质体制备效率的参数进行分析,结果表明:原生质体最大产量产生的条件是菌龄42 h,以1.5%崩溃酶、1.5%葡聚糖在0.7 mol·L-1NaCl的渗透压稳定剂中酶解3.5 h,最适酶解温度31℃,制备的原生质体在酵母蛋白胨蔗糖培养基(YPS)上再生率最高可达48.33%;通过PEG-CaCl2介导原生质体的遗传转化、gfp基因PCR检测、稳定性检测和荧光显微观察,实现了报告基因gfp在葡萄座腔菌转化子内的稳定遗传和高效表达。

分类号： S763.1

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