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核糖体工程技术选育卡伍尔链霉菌高产菌株

文献类型： 中文期刊

作者： 李文华;黄永春;杨少彬;陈璐

作者机构：

关键词： 核糖体工程;高通量筛选;卡伍尔链霉菌;ropB基因

期刊名称：中国农学通报

ISSN： 1000-6850

年卷期： 2017 年 33 卷 7 期

页码： 48-53

收录情况： 农林核心（2020版） ; 科技核心（2020版）

摘要： 通过赋予前期分离获得的一株卡伍尔链霉菌菌株TJ430利福平抗性,达到迅速提高菌株产抗生素能力的目的;采用核糖体工程技术使菌株TJ430的ropB基因发生突变从而获得利福平抗性,通过构建好的高通量筛选模型结合高效液相色谱技术,筛选正向和负向突变菌株,利用液体发酵复筛进一步确认初筛结果,通过对突变株进行基因测序寻找突变株ropB基因的突变位点;构建的高通量筛选模型能准确、快速筛选出突变菌株,分离到5株正向突变株和2株负向突变株。在负向突变株ropB基因的第280 bp处发现一个点突变,但是在正向突变株测序片段中未发现突变位点。采用的引物序列只能对ropB基因的部分序列进行测序,从正向突变菌株抗生素产量较原始菌株提高2.5倍以上,且菌丝形态发生显著变化来推测,正向突变菌株的突变位点应位于ropB基因中未测序片段。在完成原始菌株全基因组测序基础上,可重新设计引物对该菌株的全ropB基因进行测序,寻找突变位点。

分类号： Q93

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