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表达绿色荧光蛋白的MVA重组毒株的构建及筛选

文献类型： 中文期刊

作者： 黄彩云;赵志荀;朱学亮;王战红;吴香草;吴国华;张志东;张强

作者机构：

关键词： 绿色荧光蛋白(GFP);痘苗病毒MVA株;重组毒株

期刊名称：中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2019 年 7 期

页码： 2079-2087

收录情况： 北大核心（2020版） ; 农林核心（2020版） ; 科技核心（2020版）

摘要： 为了构建及筛选表达绿色荧光蛋白(GFP)的改良型痘苗病毒安卡拉(MVA)重组毒株,并对其进行鉴定,本研究基于同源重组原理设计引物,通过PCR扩增获取含有MVA两侧同源臂的外源基因GFP片段,将GFP基因片段转染到感染了MVA的CEF细胞中使之同源重组到MVA ORF086-087位点(基因组中70303-70304 bp之间),利用倒置荧光显微镜观察并标记表达GFP的单个噬斑,筛选获取重组毒株,应用倒置荧光技术、PCR及Western blotting对该重组毒株进行鉴定.结果显示,经过3轮噬斑筛选,在倒置荧光显微镜下可观察到大量表达GFP的单个噬斑,PCR扩增检测结果表明目的基因已成功整合到重组毒株MVA-GFP中.Western blotting结果表明,GFP在感染的细胞内成功表达.本研究利用基因工程技术成功获得表达GFP的重组毒株MVA-GFP,可为进一步将其他抗原基因插入GFP位点中筛选无标记的重组毒株及疫苗研究提供材料.

分类号： S852.65

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