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猪流行性腹泻病毒中和抗体PC10-IgG重组腺病毒的构建及其抗病毒效果的研究

文献类型： 中文期刊

作者： 罗毅;符芳;李亮;尹灵丹;郭珊珊;薛美;孙元;单玲玲;李忍;刘翔;冯力;刘平黄

作者机构：

关键词： PEDV;PC10-IgG;腺病毒载体;中和抗体

期刊名称：中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2020 年 NULL 卷 5 期

页码： 487-493

收录情况： 北大核心（2020版） ; CSCD（2020-2021年度） ; 农林核心（2020版） ; 科技核心（2020版）

摘要： 为研制用于治疗仔猪PED的制剂,本研究将PEDV中和抗体PC10-IgG基因序列整合至人5型腺病毒(Ad5)骨架质粒中,构建的重组质粒经转染构建重组腺病毒Ad5-PC10-IgG.通过ELISA检测Ad5-PC10-IgG感染HEK293细胞的上清,以及采用SDS-PAGE、western blot检测上清中纯化的IgG,结果显示Ad5-PC10-IgG感染HEK293细胞能够分泌表达PC10-IgG,且该抗体效价较高.又将分泌表达的PC10-IgG进行了PEDV病毒结合试验[间接免疫荧光试验(IFA)]和病毒抑制试验(荧光定量PCR和IFA).结果显示Ad5-PC10-IgG分泌表达的PC10-IgG不仅对PEDV具有良好的结合活性还能显著抑制PEDV感染Vero E6细胞.将Ad5-PC10-IgG感染猪小肠类器官模型肠小体,通过ELISA检测其感染后上清以及IFA检测感染的肠小体,结果表明Ad5-PC10-IgG可以感染肠小体并分泌表达PC10-IgG.将Ad5-PC10-IgG接种小鼠,ELISA方法检测采集的小鼠血清与肛拭子,并采用前述方法检测小鼠血清中的PC10-IgG对PEDV的结合活性及病毒抑制效果.结果显示,在接种后的第1 d、3 d、5 d的小鼠血清中均有较高含量的PC10-IgG,但在其肛拭子中没有检测到PC10-IgG,且该PC10-IgG对PEDV具有很好的结合活性和抑制其复制的效果.以上结果表明Ad5-PC10-IgG能够在体外与小鼠体内分泌表达有活性的中和抗体PC10-IgG.本研究为后续Ad5-PC10-IgG接种猪的试验以及研发PED治疗性抗体制剂奠定基础.

分类号： S852.651

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