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结核分枝杆菌蛋白酶Rv1487对宿主免疫反应作用的研究

文献类型： 中文期刊

作者： 陈春文;姜艳艳;郭若男;段祎凡;高云洁;张镇钧;冯婷婷;王慧;李梦雨;聂蝉蝉;崔莹莹;党光辉;刘思国

作者机构：

关键词： Rv1487;蛋白酶;结核分枝杆菌;巨噬细胞;免疫反应

期刊名称：中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2025 年 47 卷 7 期

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 结核病是由结核分枝杆菌(MTB)引起的一种重要人兽共患传染病,现有的卡介苗无法对MTB感染提供有效的免疫保护。为探寻更有效的MTB保护性抗原,本团队前期通过生物信息学软件分析发现MTB Rv1487蛋白具有蛋白酶活性。为研究Rv1487蛋白酶对宿主免疫反应的影响,本研究采用噬菌体介导的同源重组方法构建rv1487基因缺失株ΔRv1487和回补株ΔRv1487+Rv1487,并经PCR与southern blot鉴定正确后,将ΔRv1487与ΔRv1487+Rv1487株连续传5代,PCR鉴定结果显示,ΔRv1487+Rv1487株出现约345 bp的目的条带,ΔRv1487株则无该条带；Southern blot鉴定结果显示,经Bam H I酶切后H37Ra与ΔRv1487株分别出现4.3 kb与7.6 kb的目的条带,经Nhe I酶切后上述两株菌分别出现5.6 kb和8.9 kb的目的条带。传5代后回补株出现约435 bp的目的条带,缺失株则无该目的条带。表明正确构建了遗传稳定性较好的rv1487基因缺失株和回补株。通过检测各菌液OD_(600nm)值绘制生长曲线,利用H37Ra菌株感染小鼠和人巨噬细胞后不同时间通过qPCR检测细胞中rv1487基因的相对转录水平,将H37Ra、ΔRv1487和ΔRv1487+Rv1487株分别感染巨噬细胞12 h和24 h,通过qPCR检测促炎细胞因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)基因的相对转录水平；感染后12 h、24 h和48 h,分别采用qPCR检测细菌在巨噬细胞胞内的定植量。生长曲线测定结果显示,各菌株的生长速度基本一致；qPCR检测结果显示,与未感染H37Ra的巨噬细胞相比,感染后72 h该细胞中rv1487基因的转录水平显著升高(P

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