表达PRRSV N蛋白稳定细胞系的构建与鉴定
文献类型: 中文期刊
作者: 付宁宁;肖长广;陈梦莉;邱亚峰;李宗杰;李蓓蓓;刘珂;邵东华;马志永;魏建超
作者机构:
关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒;N蛋白;细胞系;稳定表达;慢病毒载体
期刊名称:畜牧与兽医
ISSN: 0529-5130
年卷期: 2023 年 55 卷 12 期
页码:
收录情况: 北大核心(2020版) ; ; 科技核心(2023版) ; ; 农林核心(2020版)
摘要: 旨在通过慢病毒表达系统构建稳定表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) N蛋白的Marc-145细胞系。以PRRSV SH1株感染性克隆质粒为模板,通过PCR扩增N基因,并将其克隆到慢病毒载体中,获得重组慢病毒质粒pSin-Ires-Puro-N,将重组质粒pSin-Ires-Puro-N与辅助质粒psPAS2、pMD2.G、pRSV-Rev共转染293T细胞进行慢病毒包装,获得表达N蛋白的重组慢病毒颗粒并将其感染Marc-145细胞,嘌呤霉素初步筛选阳性细胞,筛选几代后的细胞采用有限稀释法和终点稀释法获得稳定表达N蛋白的Marc-145细胞系。通过PCR鉴定表明细胞系中存在N蛋白基因,通过间接免疫荧光(IFA)和Western blot试验验证N蛋白能在细胞系中能稳定表达。本研究成功构建了稳定表达PRRSV N蛋白的Marc-145细胞系,为研制PRRSV新型复制缺陷型疫苗奠定基础。
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