碳青霉烯酶NDM-1抑制剂的ELISA筛选方法的建立
文献类型: 中文期刊
作者: 蔡鑫;姚晓慧;聂万森;杜汉宇;周黎笋;李宗杰;魏建超;刘珂;邵东华;邱亚峰;马志永;李蓓蓓;夏利宁
作者机构:
关键词: 碳青霉烯酶;NDM-1;ELISA;抑制剂;高通量筛选
期刊名称:中国动物传染病学报
ISSN: 1674-6422
年卷期: 2023 年
页码:
收录情况: 北大核心(2020版) ; ; 科技核心(2023版) ; ; 农林核心(2020版)
摘要: 本研究之目的为建立一种新型的筛选碳青霉烯酶NDM-1抑制剂的ELISA方法,该方法基于细菌青霉素结合蛋白(PBP)与碳青霉烯药物完整结构和水解产物的亲和力差异极大的原理。其基本步骤为:BSA与美罗培南的偶联物(BSA-MEM)包被于ELISA板封闭后,将待筛化合物与NDM-1蛋白同时加入反应,随后加入生物素标记的PBP蛋白(PBP-BIO),PBP-BIO可与未被水解的BSA-MEM进行结合,通过生物素-链霉亲和素系统产生的信号来表征结合的PBP蛋白以及未被水解的BSA-MEM的量,从而间接指征待筛化合物对NDM-1是否有抑制活性。通过原核表达系统,表达纯化碳青霉烯酶NDM-1,利用EDC偶联法和生物素标记法,制备BSA-MEM和PBP-BIO的偶联物,采用棋盘滴定法确定BSA-MEM量、NDM-1、待筛化合物和PBP-BIO的最佳工作浓度和反应时间等参数,并利用该方法对FDA批准药物库中的300余种化合物进行初步筛选。结果显示,最佳ELISA方案为:BSA-MEM偶联物包被量为1 μg,100 μL/孔;封闭液为1%的牛血清白蛋白,作用时间为2 h;NDM-1使用量为4 μg;待筛化合物的使用浓度为30 μmol/L,反应时间为15 min;PBP-BIO稀释度为1︰1 000,反应时间为15 min;SA-HRP作用时间为30 min,稀释度为1:3 000;TMB显色时间为15 min。利用上述建立的ELISA方法,成功从FDA批准药物库中筛选到两个潜在的NDM-1抑制剂。本研究成功建立了一种新型的NDM-1抑制剂的ELISA筛选方法,具有快速和高通量的优点,为NDM-1抑制剂的筛选提供了新方法和新思路。
分类号:
- 相关文献
[1]亚洲玉米螟几丁质酶的双靶向天然产物抑制剂及其抑制机理. 何丹婵,姜熙,杨青. 2022
[2]产NDM-1型碳青霉烯酶奇异变形杆菌的分离鉴定及耐药性分析. 王芷洋,彭浩恒,郭伟奇,王帝,张贝贝,王欣宇,胡剑刚,祁晶晶,田明星,鲍衍清,李海花,王少辉. 2023
[3]获取有机物厌氧降解产甲烷过程中关键功能类群-互营细菌培养物. 张雪,张辉,承磊. 2019
[4]大豆的孢囊线虫抗性研究新进展. 彭德良. 2016
[5]高通量筛选技术在农用杀菌剂创制研究中的应用. 于淑晶,边强,王满意,张晓,李宝聚,赵卫光. 2012
[6]重组葡萄糖氧化酶毕赤酵母高产菌株的高通量快速筛选方法. 周利伟,郜赵伟,张宇宏,张伟. 2012
[7]VIGS技术高通量筛选棉花抗黄萎病相关基因. 郭安慧,翟伟卜,郭慧敏,张珊珊,张文蔚,简桂良,韩榕,齐放军. 2016
[8]乳糖酶突变体库的构建及高活性突变体的快速筛选. 秦星,孙宁,张丰华,张宇宏,吴坤,张伟,刘波. 2014
[9]抑制番茄早疫病菌活性化合物的高通量筛选方法研究. 张晓,王满意,于淑晶,王力钟,李宝聚,赵卫光. 2010
[10]高产截短侧耳素产生菌高通量筛选方法的建立. 王学红,梁剑平,赵晓彬,刘宇,郝宝成. 2013
[11]核糖体工程技术选育卡伍尔链霉菌高产菌株. 李文华,黄永春,杨少彬,陈璐. 2017
[12]饲料用酶制剂的研究进展与趋势. 杨培龙,姚斌. 2009
[13]蛋白质定向进化技术的研究进展. 苏怡丹,伍宁丰,刘国安. 2009
[14]厌氧微生物培养分离:过去、现在和未来. 承磊,马诗淳,巫可佳,张辉,邓宇. 2021
[15]大豆的孢囊线虫抗性研究新进展. 彭德良. 2016
[16]高通量筛选差异表达基因技术简介. 狄冉,储明星. 2010
[17]植酸酶发展现状和研究趋势. 丁强,杨培龙,黄火清,王亚茹,姚斌. 2010
[18]绵马酚抑制多粘菌素耐药关键蛋白MCR-1的机制研究. 贾月,华欣,刘思国. 2020
[19]寄生虫过氧化物还原酶及其抑制剂研究进展. 彭梦华,张厚双,周金林. 2019
[20]DF-1细胞中泛素-蛋白酶体系统对新城疫病毒复制的影响. 曲昱蓉,詹媛,仇旭升,谭磊,孙英杰,宋翠萍,孟春,丁铲. 2017
作者其他论文 更多>>
-
侧流免疫层析技术在兽医诊断中的应用
作者:李娜;杜汉宇;王真真;贾楠楠;宋若楠;朱杰;李传峰;刘光清;孟春春
关键词:侧流免疫层析;荧光定量检测;兽医诊断
-
猪繁殖与呼吸综合征病毒GP4蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备
作者:付宁宁;周露佳;陈梦莉;周黎笋;陈小珺;董妮华;肖长广;邱亚峰;李宗杰;李蓓蓓;刘珂;邵东华;马志永;魏建超
关键词:猪繁殖与呼吸综合征病毒;GP4蛋白;原核表达;多克隆抗体
-
乳酸片球菌对抗生素相关性腹泻导致的肠道菌群紊乱的修复作用
作者:苑中芬;聂万森;姚晓慧;于曰英;邓祥红;胡育华;米荣升;李宗杰
关键词:乳酸片球菌;抗生素相关性腹泻;肠道菌群
-
猪TRIM32分子的克隆、表达及其功能分析
作者:李慧;张彦兵;解艺璇;陆艳;相笑;刘珂;魏建超;李宗杰;邵东华;李蓓蓓;马志永;邱亚峰
关键词:TRIM32;真核表达;抗病毒反应;HP-PRRSV
-
MALDI-TOF质谱技术对猪肠道菌群中携带mcr-1细菌的鉴定与聚类分型
作者:高芸;轩慧勇;姚晓慧;魏建超;刘珂;邵东华;邱亚峰;马志永;李蓓蓓;夏利宁
关键词:mcr-1基因;基质辅助激光解析电离飞行时间质谱;聚类分型;猪;肠道菌群
-
表达PRRSV N蛋白稳定细胞系的构建与鉴定
作者:付宁宁;肖长广;陈梦莉;邱亚峰;李宗杰;李蓓蓓;刘珂;邵东华;马志永;魏建超
关键词:猪繁殖与呼吸综合征病毒;N蛋白;细胞系;稳定表达;慢病毒载体
-
猪链球菌2型、7型及9型小鼠感染模型的初步建立
作者:闫祖杰;潘如意;张俊杰;马晓春;魏建超;李蓓蓓;刘珂;邱亚峰;马志永;刘聚祥
关键词:猪链球菌;BALB/c小鼠;动物模型;荧光定量