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沙地葡萄茎痘伴随病毒双重巢式RT-PCR检测方法的建立与应用

文献类型： 中文期刊

作者： 胡国君;张尊平;范旭东;任芳;翟秀丽;时晓燕;董雅凤

作者机构：

关键词： 葡萄;沙地葡萄茎痘伴随病毒;巢式RT-PCR;双重巢式RT-PCR

期刊名称：中国果树

ISSN： 1000-8047

年卷期： 2022 年 8 期

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; 科技核心（2021版） ; 农林核心（2020版）

摘要： 根据GenBank数据库中的沙地葡萄茎痘伴随病毒(grapevine rupestris stem pitting-associated virus,GRSPaV)全基因组序列设计了 2组巢式RT-PCR检测引物repF1/R1→repF2/R2和cpF1/R1→cpF2/R2,扩增片段分别为902 bp和438 bp.通过对第1轮PCR扩增中引物组合repF1/R1-cpF1/R1、dNTPs、Taq DNA聚合酶和cDNA用量的优化,以及第2轮PCR扩增中引物组合repF2/R2-cpF2/R2、dNTPs和Taq DNA聚合酶用量的优化,建立了 GRSPaV双重巢式RT-PCR检测方法.采用该方法对109份葡萄样品进行检测,结果显示,2对普通PCR引物RSP 52/53 和 RSP 9F/9R 的合计检出率为 65.1％,2 组单一巢式 PCR 引物 repF1/R1-repF2/R2 和 cpF1/R1→cpF2/R2的检出率总和为93.6％,而双重巢式PCR引物组合repF1/R1-cpF1/R1→repF2/R2-cpF2/R2的检出率也达到93.6％.该技术在保证检测效率的基础上降低了检测成本,适用于大量田间样品的检测.

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