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一种基于lacZ基因和pUC复制子的原核启动子报告系统的构建及评价

文献类型： 中文期刊

作者： 付立霞;徐敬潇;韩先干;杨辉;赖迎迢;黄志斌;龚建森

作者机构：

关键词： 报告基因;β-半乳糖苷酶;定点突变;启动子报告系统;pUC复制子;阿拉伯糖启动子

期刊名称：生物工程学报

ISSN： 1000-3061

年卷期： 2021 年 37.0 卷 1.0 期

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; CSCD（2020-2021年度） ; 科技核心（2020版）

摘要： 为构建一种具有广泛适用性的原核启动子报告系统,以质粒pFLX107为骨架,通过多克隆位点替换和序列改造,构建出基于lacZ基因和pUC复制子的pFGH系列报告载体,然后以lacZ基因缺失株MC4100为宿主菌筛选背景活性最低的质粒作为最终的报告系统,并利用诱导型启动子araBAD和组成型启动子rpsM分别对其进行测试.结果显示,在所构建的pFGH系列质粒中,pFGH06的背景活性显著低于同系列其他质粒,在28℃培养条件下甚至显著低于低拷贝参考质粒pRCL的活性(P＜0.01).进一步的评估测试显示,质粒pFGH06可用于诱导型启动子或组成型启动子的克隆及活性测定,且在模拟应用于启动子筛选时,通过蓝白斑筛选即可实现对目标启动子的完全识别.与已报道的原核启动子报告系统相比,pFGH06具有体积小、克隆位点多、背景活性可调、对启动子筛选识别效率高等优点,具有广泛的应用前景.

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