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RNAi抗虫作物中RNA成分免提取一步式RT-qPCR快速检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 安艺婷;高鸿飞;翟杉杉;姚晓青;杨瑶;蔡万伦;吴刚

作者机构：

关键词： RNAi作物;RNA成分;免提取;一步式RT-qPCR扩增

期刊名称：中国油料作物学报

ISSN： 1007-9084

年卷期： 2025 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 二化螟Chilo suppressalis是水稻重大农业害虫之一，其寄主种类多，分布广泛且危害严重，防治难度逐年增加。植物介导的RNA干扰技术（Plant-mediated RNA interference,RNAi）是一种新兴的作物保护技术，前期研究以二化螟的一个小的热休克蛋白基因（Chloroplast Small Heat Shock Protein,CssHsp）作为水稻RNAi靶点创制抗虫RNAi水稻。本研究以RNAi水稻叶片直接作为模板，开发了一种新型免提取一步式RT-qPCR快速检测植物中dsRNA成分的方法。针对CssHsp靶标序列设计了特异性引物和探针，优化了DNA聚合酶和逆转录酶组合、引物探针浓度、反应程序以及叶片取样直径大小。结果显示，优选扩增组合物中酶的组合为RRM014/200U，优选引物探针浓度为0.6/0.3μmol/L，优选叶片取样直径大小为1.5 mm。结合便携式荧光扩增仪，优选扩增程序时间为31 min。该方法从制样到结果鉴定全程分析不超过35 min，能够在田间快速准确、操作简单地鉴定RNA成分，为监测和掌握抗虫RNAi作物在不同生长时期表达目标dsRNA的情况以及对于害虫的防治提供精确的动向选择。

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